● 摘要
九节菖蒲为毛茛科阿尔泰银莲花植物Anemone altaica Fisch.exe C.A.Mey.的干燥根状茎，又名小菖蒲、节菖蒲、京玄参和菊形双瓶梅等，性微温、味辛。主要分布于陕西、山西、河南、内蒙古和甘肃等地。药典记载有开窍化痰和醒脾安神之功效。用于热病神昏、癫痫、神经官能症、耳鸣耳聋、胸闷腹胀和食欲不振等的治疗，外治痈疽疮癣。九节菖蒲含有多种药效成分如白头翁素、β-谷甾醇和琥珀酸等；九节菖蒲能很明显的抑制胃肠肌电活动、具有中枢神经抑制作用，除此之外，目前尚无其他九节菖蒲现代药理作用研究的报道。因此，有必要对九节菖蒲的药理作用、治疗功效及有效成分分析进行进一步研究探讨。本文对九节菖蒲的抗氧化、抗菌和镇痛的生物活性进行了初步研究，并对其有效成分琥珀酸和脂溶性化学成分进行了分析，为深入研究及开发利用九节菖蒲提供参考和依据。主要研究内容和结果如下：
（1）比较研究九节菖蒲不同提取部位的体外抗氧化活性。采用回流提取法对九节菖蒲依次进行95 %和75 %乙醇提取，萃取分离提取物依次得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水5个不同极性的提取部位。采用分光光度法测定各提取部位对二苯代苦味酰自由基（DPPH·）的清除能力、在β-胡萝卜素/亚油酸体系中的抗氧化特性及其总还原力。在终浓度为2.0 mg/mL时，九节菖蒲乙酸乙酯提取部位对DPPH·的清除作用最强，清除率为95.41%，氯仿提取部位的清除率为89.93 %，稍低于乙酸乙酯提取部位，其次是水提取部位，抑制率为87.54%。氯仿提取部位、乙酸乙酯提取部位和水提取部位的IC50分别为0.22 mg/mL、0.21 mg/mL和0.52 mg/mL。在β-胡萝卜素/亚油酸体系中，九节菖蒲的几种极性提取部位中，氯仿提取部位对β-胡萝卜素漂白的抑制率下降最少，从77.93%下降到37.95%，其次是乙酸乙酯提取部位，从72.41%下降到19.55%，再次是水提取部位，从74.14%下降到11.14%。在铁离子还原力的体系中，随着浓度的增高，乙酸乙酯和氯仿相提取部位的还原力比其它相增大的更快。当浓度>2.0 mg/mL时，九节菖蒲各提取部位的还原力为乙酸乙酯提取部位 > 氯仿提取部位> 水提取部位>石油醚提取部位>正丁醇提取部位。九节菖蒲5个提取部位均有抗氧化活性。其中，乙酸乙酯和氯仿提取部位的抗氧化能力较强。
（2）研究并比较九节菖蒲不同提取部位的抗菌作用。采用牛津杯法和96孔板法对上述各提取部位进行体外抗菌活性研究。在所试浓度下，九节菖蒲氯仿和乙酸乙酯提取部位对所试细菌均有不同程度的抑制作用；乙酸乙酯提取部位在6.25 mg/mL时对所有供试菌种都有抑菌作用，氯仿提取部位在0.78 mg/mL时对所有供试菌种都有抑菌作用，氯仿和乙酸乙酯提取部位在50 mg/mL时对所试菌种都有杀菌效果。九节菖蒲石油醚、正丁醇和水提取部位无抑菌活性。
（3）研究九节菖蒲镇痛活性。采用小鼠热板法与醋酸扭体法，对九节菖蒲各提取部位镇痛作用进行了研究。当剂量为500 mg/kg时，氯仿和乙酸乙酯提取部位延长热板致小鼠疼痛的痛阈值作用最好，但是与对照组相比没有显著差异（P>0.05），对热刺激导致的疼痛没有显著缓解作用，对于中枢性疼痛无显著影响。氯仿和乙酸乙酯提取部位能够显著抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的疼痛反应，对于麻醉性疼痛有显著影响，减少扭体次数，抑制率分别为65.72%和25.38%，其中氯仿提取部位与对照组相比存在极显著差异（P<0.01）。九节菖蒲石油醚、正丁醇和水提取部位无镇痛活性。
（4）建立了九节菖蒲中琥珀酸含量的HPLC 测定法。采用Kromasil C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm) ；甲醇-0.02 mol/L KH2PO4缓冲液（7:93）(pH 2.5)为流动相；流速0.5 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为214 nm。琥珀酸在4～48 μg范围内具有良好的线性关系，平均加样回收率为99.15% 。九节菖蒲样品中的琥珀酸含量，以干燥品计为 0.200%～0.318 %。该方法可行，重复性好，可用于九节菖蒲中琥珀酸含量的测定。
（5）五种产地九节菖蒲脂溶性成分GC-MS比较分析。采用索氏提取法提取脂溶性成分，甲酯化后采用气相色谱-质谱(GC-MS) 联用技术分离并鉴定其组分，并用面积归一化法计算出各组分的相对百分含量。宁夏、山西、河南、四川和陕西九节菖蒲中分别鉴定出18、22、20、20和20种脂溶性成分，相对含量分别为88.14%、96.17%、71.37%、89.67%和77.08%。五种产地九节菖蒲中的共有成分为邻苯二甲酸、十五酸、9-十六烯酸、棕榈酸、14-甲基-十六酸、亚油酸、油酸和硬脂酸8种化合物，共有主成分为饱和脂肪酸棕榈酸和不饱和脂肪酸亚油酸。宁夏、陕西产九节菖蒲脂溶性成分中主要化学成分为亚油酸（宁夏46.5%，陕西30.88%）、亚麻酸（宁夏17.2%，陕18.02%）和棕榈酸（宁夏15.8%，陕西16.33%）等。山西、四川产九节菖蒲脂溶性成分中主要化学成分是亚油酸（山西36.81%，四川40.09%）、棕榈酸（山西25.72%，四川13.7%）和岩芹酸（山西22.97%，四川24.3%）等。河南产九节菖蒲脂溶性成分中主要化学成分是亚油酸（37.3%）和棕榈酸（19.3%）。不同产地九节菖蒲中脂溶性成分组成及相对含量差异较大，可为九节菖蒲的鉴别和临床应用提供参考。