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题目:以寡肽为分子识别物质检测前列腺抗原催化荧光分析新方法的研究

关键词:磁性荧光探针,前列腺特异性抗原,肽,异硫氰酸荧光素

  摘要


恶性肿瘤已成为人类主要的死亡病因之一,并且,恶性肿瘤的发病率在全球范围内呈现不断上升和有年轻化的趋势。建立简单、灵敏、快速和选择性好的恶性肿瘤生物标示物检测新方法,对恶性肿瘤的预防、诊断和治疗具有十分重要的意义。
前列腺特异性抗原(Prostate Specific Antigen, PSA)是由前列腺细胞分泌的一种糖蛋白。血清中的PSA被公认为前列腺癌的标志物。PSA筛查可以为前列腺癌患者提供早期诊断的资料,为前列腺癌患者提供更佳的治疗机会,提高前列腺癌患者的预期生存期限,降低前列腺癌的死亡率。
荧光标记技术是将荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等分子识别物质上的一种技术。这种技术通过荧光信号物质的特定基团与分子识别物质的特定基团的反应来完成标记过程,利用标记物的荧光特性来提供被检测对象的信号。荧光标记方法具有非放射性、操作简便、灵敏度高和选择性好等优点。荧光标记物种类多、标记方法灵活,可应用于多种生物大分子及药物的检测。
本论文提出以寡肽为分子识别物质建立检测PSA 的催化荧光分析新方法的研究课题,以特定寡肽为分子识别物质、金磁微粒为载体、荧光剂为信号物质,建立高灵敏度、高选择性荧光检测PSA新方法。本论文分为两部分:第一部分为综述部分,第二部分为研究报告部分。
第一部分为综述。简要介绍了肽及肽的来源及制备、荧光分析方法的原理和应用、以及荧光标记技术的原理、荧光标记物以及荧光标记的方法;介绍了目前前列腺疾病患者血清前列腺特异性抗原检测方法;阐述了金磁纳米微粒的性质、制备以及应用;评述了以多肽作为分子识别物质的生物分析法的研究进展。最后提出了本论文的研究内容及意义。
第二部分为研究报告部分,主要内容为:
    以寡肽为分子识别物质检测活性前列腺特异性抗原(PSA)的荧光检测的研究。主要以特定寡肽(氨基酸序列为CHSSKLQK)作为分子识别物质,异硫氰酸荧光素作为信号物质,在包金的磁性微粒表面,自组装特定寡肽(端氨基酸残基为半胱胺酸),该寡肽另一端氨基酸的氨基与荧光试剂 (异硫氰酸荧光素FITC )的异硫氰基进行氨-异硫氰基反应,以共价键连接,使异硫氰酸荧光素偶联在该寡肽(CHSSKLQK)的K端,合成磁性荧光探针。在PB溶液中,该磁性荧光探针与PSA特异性作用之后,该寡肽在谷氨酰胺(Q)与赖氨酸(K)之间断裂,赖氨酸带着荧光素(FITC)脱落进入溶液相,磁性分离后,溶液的荧光强度增强。基于此,建立了检测PSA的荧光分析新方法。实验结果表明荧光发光强度信号与PSA的浓度在1.0×10-10g/mL~1.0×10-12 g/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为8.14×10-13 g /mL。该法具有简单、灵敏、选择性好和快速等优点。