● 摘要
毛细管电泳技术(CE)是出现在8O年代早期的一种有效分离手段。它可以用来分离样品中含量极低的成分。它因具有分离时间短，仪器简单，操作成本低等特点而得到广泛的研究。在CE的应用中，由于进样体积小，毛细管内径小和样品中待测组分含量低等特点，缺乏高灵敏度的检测器已成为限制该技术应用的主要因素。目前，大多数商品化的毛细管电泳仪上采用紫外可见光吸收检测，因为它具有应用范围广，成本低的特点。但因为毛细管内径通常小于1OOμm，因此光路长度受到限制，从而导致灵敏度不高。电化学检测可以得到较高的灵敏度，而且受到进样量的影响比较小，但在实际样品的测定中存在着电极表面容易被污染的问题。质谱检测具有较高的灵敏度和准确度，但其设备太昂贵，应用受到限制。激光诱导荧光(LIF)由于背景信号低，样品用量少，是CE中最灵敏的方法之一。它是用激光光源激发待测物产生荧光，然后检测。对于非荧光物质，则需采用柱前或柱后衍生为荧光物质后再检测。毛细管电泳-激光诱导荧光法的应用非常广，包括环境、食品和临床分析，多肽和蛋白质分析，单细胞分析和DNA分析等。随着激光技术的发展，激光光源越来越便宜，新的多维激光检测器包括波长分辨、时间分辨和偏振荧光检测器等的相继问世，使得毛细管电泳－激光诱导荧光法得到愈来愈广泛的应用。在本文的研究工作中，我们主要研究了毛细管电泳-激光诱导荧光在药物的手性分离和药代动力学研究中的应用。各项研究工作如下：第一部分：采用自制的羧甲基-β-环糊精(CM-μ-CD)作手性分离剂(5mmo1/L)，以50mmo1/L的硼砂作缓冲介质，用异硫氰酸荧光素作衍生试剂，采用柱前衍生的方法，手性拆分了7种氨基酸(亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、丙氨酸、缬氨酸和β-苯丙氨酸)。该方法具有较高的灵敏度和分离度，其中分离度最大的β-苯丙氨酸达l5.28。第二部分：普奈洛尔(PPL)分子中的氨基也能与异硫氰酸荧光素反应，得到衍生产物FITC-PPL。以β-环糊精(β－CD)作为手性分离剂，用pH=9.O的硼砂溶液作电解液，手性拆分了普奈洛尔衍生物非对映体。在所选择的条件下，普奈洛尔衍生物对映体可以达到基线分离。该方法线性范围宽，同内精密度和日间精密度都令人满意，检测限低，灵敏度高，可以用来研究普奈洛尔的药代动力学。第三部分：首次将微超滤.毛细管电泳－激光诱导荧光技术用于药物的药代动力学研究。分别给5只家兔口服适量阿替洛尔药片后，在24小时内收集11次血样，离心后将血浆超滤以除去蛋白质等生物大分子。将超滤液与等体积的1×1Oˉ3mol/L的FITC溶液在2O℃的暗室中衍生过夜。由于血浆中的氨基酸的衍生产物的迁移时间比阿替洛尔的衍生产物的长，故不干扰阿替洛尔的测定。方法的日内精密度和日间精密度令人满意，RSD分别为3.1％和4.3％。线性范围为5×1Oˉ6~2×10ˉ3g/L。该法灵敏度高，选择性好。第四部分：采用柱前衍生的方法，结合毛细管电泳.激光诱导荧光和微超滤技术，测定了雄性家兔血浆中的美托洛尔含量，并且建立了口服酒石酸美托洛尔片后的家兔的药代动力学曲线，拟合了最优房室数，得到了一系列药代动力学参数。该方法具有较高的的灵敏度和选择性。