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题目:枸杞多糖的提取、分离纯化、溶液性质及其结构的初步研究

关键词:枸杞多糖,分离纯化,溶液性质,抗氧化活性,结构分析

  摘要


枸杞多糖是从枸杞中提取的一种水溶性多糖,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种药理作用,是枸杞子中调节免疫、延缓衰老的主要活性成分。以往对枸杞多糖的研究多聚焦于其多种生物医学活性和提取工艺优化,然而对于枸杞多糖的化学组成及分子空间结构研究的报道尚不多见,以致许多枸杞多糖的物化性质和生理功能无法在结构上得以解释。本论文在综合国内外研究进展的基础上,研究了水提枸杞多糖WLBP3-Ⅰ的化学组成、溶液性质和部分生物活性,并初步研究了其化学结构。通过以上研究,可为枸杞功能性产品的开发提供理论依据。取得的实验结果如下:
1.本文采用水提醇沉法提取枸杞多糖,利用苯酚—硫酸法测得枸杞多糖WLBP的糖含量为69.74%。经季铵盐沉淀法分离后,WLBP1、WLBP2、WLBP3的得率分别为25%,2.5%,30%,对WLBP3进行SephadexG-150凝胶色谱柱层析和高效液相分析,得出WLBP3的亚组分WLBP3-Ⅰ是分子量均一,纯度较高的多糖组分,且经过紫外-可见分光光度法测定该多糖组分为一种含有结合蛋白的多糖复合物。
2. 采用气相色谱仪研究WLBP3-Ⅰ的单糖组成,研究发现其单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,且摩尔比率为2.07:2.38:3.11:1.00:1.12:2.86。并经高效液相色谱分析计算得出WLBP3-Ⅰ的平均相对分子量为260016Da。
3. 圆二色谱和激光粒度实验表明枸杞多糖的溶液性质会随着多糖浓度、温度、溶液酸碱度的变化而改变,金属离子和络合物的加入会极大的增加分子在溶液中的不对称性。刚果红试验说明枸杞多糖WLBP3-Ⅰ不存在三股螺旋结构,而主要是以无规卷曲的形式存在。环境扫描电镜和原子力显微镜观察发现WLBP3-Ⅰ呈现高分支结构,主要呈链状,且糖链间多相互缠绕聚集成环状,主链长几百纳米到几微米不等,支链长度在100 nm~300 nm范围内。
4. 利用傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、核磁共振(1H NMR)技术对WLBP3-Ⅰ的结构研究表明,WLBP3-Ⅰ由六种单糖构成且糖环构型主要以β吡喃糖形式为主。
5. 抗氧化实验结果表明,枸杞多糖具有一定的抗氧化能力。对于不同的自由基,效果不尽相同,其中对超氧阴离子具有较强的清除作用。对于不同提取方式提取的多糖,超声提取多糖比水提多糖的抗氧化性普遍略强。