2017年青海大学生态环境工程学院616分子生物学与生物化学之现代分子生物学考研导师圈点必考题汇编
● 摘要
一、名词解释
1． 蛋白质组（proteome ）
【答案】蛋白质组是指一种生物或一个细胞、组织所表达的全套蛋ft 质（protein ）, 即包括一种细胞乃至一种生 物所表达的全部蛋白质。
2． Blue-white screening
【答案】蓝白斑筛选。蓝白斑筛选是指基于半乳糖苷酶系统的一种重组子筛选方法。其基本原理是很多载体都
携带一段来自大肠杆菌的
序列的宿主细胞。宿主经上述质粒转化后，
整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补
活性蛋白质。由
互补而产生的操纵子DNA 区段，
其中有半乳糖苷酶基因的调控序列和前146个氨基酸的编码信息，这种载体适用于可编码半乳糖苷酶C 端部分 基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完，产生完整 细菌在诱导剂的作用下，在生色底物存在时产生易于识别的蓝色菌落。而当外源DNA 插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。
3． 拓扑异构酶（topoisomerase ）
【答案】拓扑异构酶是指能在闭环DNA 分子中改变两条链的环绕次数的酶，其作用机制是先切断DNA ，让DNA 绕过断裂点以后再封闭形成双螺旋或超螺旋DNA 。
4． 编码链（coding strand）
【答案】编码链是指DNA 双链中含编码蛋白质序列的那条链，与模板链互补，也称有义链（sensestrand ）或正链。其序列与信使核糖核酸相同，只是信使核糖核酸中的U （尿嘧啶）组成与编码链中的T （胸腺嘧啶）组成相区别。
5． 阻遏蛋白
【答案】阻遏蛋白是指一类在转录水平对基因表达产生负控作用的蛋白质，在一定条件下与DNA 结合，一般具有诱导和阻遏两种类型。
6． 核酸分子杂交（hybridization ）
【答案】核酸分子杂交是指应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA （或RNA ）片段，按碱基互 补关系形成杂交双链分子的一项实验技术，杂交双链可以在DNA 与DNA 链之间，也可在RNA 与DNA 链之间 形成。
7． 双向电泳
【答案】双向电泳是指将样品进行电泳后，在它的直角方向再进行一次电泳，为了不同的目的而采用不同的组合 方式的分离方法，目前双向电泳大多是指第一向为等电聚焦，平衡后，第二向为SDS 电泳。
8． 分子伴侣（molecular chaperone）
【答案】分子伴侣是指一类序列上没有相关性但有共同功能的保守性蛋白质，它们在细胞内能帮助其他多肽进行正确的折叠、组装、运转和降解，如热休克蛋白。
二、简答题
9． 假设某哺乳动物基因可能编码了脂肪酸脱氢酶， 请在酵母细胞中设计试验研究该基因的功能。
【答案】（1） PCR 扩増哺乳动物该基因，接着对其进行克隆；
（2）将克隆完成的目的基因片段插入到酵母表达载体的相应启动子下；
（3）把构建好的携带目的基因的表达载体转化到酵母脂肪脱氢酶突变体中，观察结果。 脂肪酸脱氢酶突变体中，代谢活动异常，脂肪酸脱氢酶涉及的代谢反应终止，当含该基因的表达载体转化突变体后，相应代谢途径的生化反应恢复正常即说明该基因编码了脂肪酸脱氢酶，并执行了相应的功能。
10．什么是信号肽？它在序列组成上有哪些特点？有什么功能？
【答案】（1）信号肽是指存在于蛋白多肽链上的在起始密码子之后能启动蛋白质运转的一段多肽序列。该序列常 常位于蛋白质的氨基末端，长度一般在13〜36个残基之间。
（2）信号肽在序列组成上的特点有：
①一般带有10〜15个疏水氨基酸；
②常常在靠近该序列N-端疏水氨基酸区上游带有1个或数个带正电荷的氨基酸；
③在其C-末端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性氨基酸，离切割位点最近的那个氨基酸往往带有很短的侧链（丙氨酸或甘氨酸）。
（3）信号肽的功能
根据信号肽假说，当分泌蛋白的翻译进行到50-70个氨基酸残基之后，信号肽开始从核糖体的大亚基露出， 被糙面内质网膜上的受体识别，并与之相结合。信号肽过膜后被内质网腔的信号肽酶水解，正在合成的新生肽随 之通过蛋白孔道穿越疏水的双层磷脂。一旦核糖体移到mRNA 的终止密码子，蛋白质合成即告完成，翻译体系 解散，膜上的蛋白孔道消失，核糖体重新处于自由状态。
因此信号肽的功能是负责把蛋白质引导到细胞内不同膜结构的亚细胞器内。
11．有一个研究生想使他所感兴趣的一个大肠杆菌的基因严格受碳源控制，在葡萄糖供应时，该基因不表达；当供应乳糖时，该基因大量表达。你如何帮助他实现这种想法？依据是什么？
【答案】依据条件启动子对下游基因的调控机理，将乳糖操纵子的启动子元件（包括上游阻遏基因）与目的基因 融合并构建到一个新的载体分子中，并将新克隆分子导入大肠杆菌中扩增。乳糖操纵子的启动子区域位于阻遏基 因与结构基因中间，阻遏基因表达的阻遏物结合到启动子区，抑制下游结构基因转录，而诱导物与阻遏物结合后 导致阻遏物解离下来，阻遏解除，下游结构基因转录。而阻遏物（异构乳糖或）可由碳源影响，葡萄糖存在时，阻遏作用不解除，乳糖存在时阻遏解除。因此可以设计实验满足题中研究生的想法。
12．假如你得到一个据说通过改造并适合作为基因治疗载体的病毒，你将如何分析这种可行性？主要在哪些 方面做改造？你将如何测试改造后的病毒载体的效率和安全性？
【答案】（1）作为基因治疗载体的病毒的基本要求：
①能够感染多种生物的多种类型不同的细胞；
②易于改造并易于插入外源基因，能装配成病毒颗粒；
③能使外源基因完全整合到宿主细胞中，并且外源基因要有较高的表达水平；
④对人体安全。
（2）改造包括：
①改造病毒壳粒蛋白的抗原表位；
②减少病毒DNA 中非必需基因的表达；
③减少病毒载体的免疫反应及对细胞的毒性；
④改造所选择的目标基因的插入位点，便于目的基因的装载。
（3）测试病毒载体的效率与安全性：
①病毒载体的有效性表现在能够尽量多地将目的基因导入靶细胞并整合到宿主染色体上，因此可通过检测目的基因的含量来衡量。
②病毒载体的安全性表现在载体对细胞正常代谢的影响。因为病毒载体中可能产生有传染性、野型或辅助型 病毒，随机整合于宿主基因组中，活化癌基因或抑制癌基因失活；也有可能病毒载体自身编码的基因产物过度表达，引起细胞及机体不适的反应。
13．什么是核定位序列？其序列组成由哪些特点？其主要功能是什么？
【答案】（1）核定位序列（NLS ）是能与入核载体相互作用，将蛋白质运进细胞核内的氨基酸序列，是蛋白质中 的一种常见的结构域。
（2）核定位序列组成特点
①具有一个带正电荷的肽核心；
②通常是由一短的富含碱性氨基酸的序列；
③对其连接的蛋白质无特殊要求，可以位于核蛋白的任何部位，也能够引导其他非核蛋白进入细胞核；
相关内容
相关标签