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一、名词解释

1． 等电聚焦

【答案】

等电聚焦 是指利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性pH 梯度中进行蛋白质的分离和分析的技术。

2． Non-Watson-Crickbasepairing

【答案】非沃森-克里克式碱基配对。非沃森-克里克式碱基配对是指不完全依照Α-T/U，C-G 配对的一些碱基配对现象，如U-G 配对。

3． 核酸分子杂交（hybridization ）

【答案】核酸分子杂交是指应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA （或RNA ）片段，按碱基互 补关系形成杂交双链分子的一项实验技术，杂交双链可以在DNA 与DNA 链之间，也可在RNA 与DNA 链之间 形成。

4．

【答案】，是指一种利用非放射即荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization）

性的劳光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合

起来，通过荧光标记的DNA 探针与待测样本的DNA 进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。

5． 单顺反子mRNA （monocistronic mRNA）和多顺反子mRNA （polycistronic mRNA）。

【答案】单顺反子mRNA 是指能翻译成一条肤链的信使核糖核酸（mRNA ）来自单顺反子;

，多顺反多顺反子mRNA 是指两个以上相关基因串在一起转录所得到的信使核糖核酸（mRNA ）

子mRNA 一般可同步翻译产生功能相关的多个蛋白质或酶。

6． DNA 的甲基化（DNAmethylation ）

【答案】DNA 的甲基化是指一种表观遗传修饰，它是由DNA 甲基转移酶催化s-腺苷甲硫氨酸作为甲基的供体，将胞嘧啶转变为

7． 重组修复 甲基胞嘧啶的一种过程。

【答案】重组修复是指遗传信息有缺损的子代DNA 分子从同源DNA 的母链上将相应的核苷酸序列移至缺口处，再合成新的序列来填补母链的空缺的修复过程，因为发生在DNA 复制之后，

又称复制后修复。

8． tmRNA

【答案】转移—信使RNA 。tmRNA 是指细菌体内一种修复翻译水平上受阻的遗传信息表达过程的反式翻译机制的核心分子，它兼具tRNA 和mRNA 的特点，在SmpB 蛋白的帮助下特异性识别携带mRNA 缺失体的核糖体，在核糖体蛋白S1的传递作用下结合在A 位点上，一方面延续被中断的mRNA 上的遗传信息，一方面终止蛋白质的合成，释放被束缚的核糖体和tRNA 进入新的翻译过程。

9． 移码突变（frameshi Kmutation）

【答案】移码突变是指由于单个碱基或者非三的整倍数的碱基的插入或缺失引起的从突变位点开始整个可读框的改变，从而产生完全不同的一系列氨基酸的突变。

10．Blue-white screening

【答案】蓝白斑筛选。蓝白斑筛选是指基于半乳糖苷酶系统的一种重组子筛选方法。其基本原理是很多载体都

携带一段来自大肠杆菌的

序列的宿主细胞。宿主经上述质粒转化后，

整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补

活性蛋白质。由

互补而产生的操纵子DNA 区段，

其中有半乳糖苷酶基因的调控序列和前146个氨基酸的编码信息，这种载体适用于可编码半乳糖苷酶C 端部分 基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完，产生完整 细菌在诱导剂的作用下，在生色底物存在时产生易于识别的蓝色菌落。而当外源DNA 插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。

二、简答题

11．真核生物如何进行翻译后水平的调节？

【答案】真核生物基因翻译的最初产物是一个大的蛋白质分子。有时，必须经酶切成更小的分子才能有生物活性。 加工过程包括：

（1）除去起始的Met 或随后的几个残基；

（2）切除分泌蛋白或膜蛋白

（3）形成分子内的二硫键；

（4）肽键断裂或切除部分肽段；

（5）氨基酸修饰；

（6）加上糖基、脂类分子或配基。

此外需在分子伴侣帮助下进行折叠，并正确定位，这种后加工过程在基因表达调控上起主要作用。

末端的信号序列；

12．有几种终止密码子？它们的序列和别名是什么？

【答案】（1）有三种终止密码子。

（2）它们的序列为UAA 、UGA 和UAG , 别名分别为赭石密码、琥珀密码和蛋白石密码。

13．简述2~3种检测蛋白质间相互作用的方法。

【答案】蛋白质相互作用分为3个方面：一是多亚基蛋白质的形成；二是多成分的蛋白复合体，如核孔复合体等； 三是瞬时蛋白质相互作用。

（1）蛋白质亲和层析

将所研究蛋白的配体蛋白预先连接在基质如琼脂糖珠上，连有配体蛋白的琼脂搪置于过滤柱上，当含有所研 究蛋白的混合悬液经过过滤柱时，目标蛋白就会粘在柱子上。然后用低盐缓冲液冲去杂质，再用高盐缓冲液或十二烷基硫酸钠（SDS ）将粘在柱子上的目标蛋白洗脱下来进行检测。在亲和柱上，可利用纯化的融合蛋白以两种 方式检测相互作用：一种是将融合蛋白共价连接在树脂上，让抽提物过柱；二是把融合蛋白非共价结合于琼脂糖 珠上，使抽提物和珠子混在一起. 该方法具有较高的灵敏性，但可能存在假阳性，如2个蛋白通过中间蛋白相互 连接也会被抽提出来。

（2）亲和印迹

蛋白质用聚丙烯酞胺凝胶电泳（PAGE ）胶分离后，转移至硝酸纤维素膜上，然后利用特异性蛋白质、肽段 或配体作为探针检测膜上的蛋白质。该技术与免疫印迹方法不同的是，免疫印迹使用抗体作为检测的探针。该方 法可以直接分析全细胞裂解液等蛋白质复合物，而不需要纯化蛋白。所以. 它特别适合于分析膜蛋白，如细胞受体等。但是，需要特别注意的是，通常混合物在有SDS 存在的情况下分离，而在印迹时需要去除变形剂，使变性的蛋白质全部或部分复性。如果蛋白质在变性后无法复性，则需要一个非变性的胶分离系统。

（3）免疫共沉淀

免疫共沉淀是一种非常经典的蛋白质一蛋白质作用分析方法。用带基质（如琼脂糖珠）的抗体将细胞裂解混 合物中的蛋白复合物沉淀下来，再用另一种抗体检测是否蛋白复合物中有所需要的目标蛋白。用此方法可检测到 自然生理条件下的蛋白一蛋白作用，可信度高，但是最好使用单克隆抗体，以防制备多克隆抗体时污染的其他抗 体存在或者多克隆抗体自身的干扰。检测到的阳性结果可能是间接通过第三方蛋白结合，而且检测灵敏度比亲和 层析的方法低。

（4）谷胱甘肽转移酶沉淀实验

该方法的原理是将研究的目的蛋白X 与谷胱甘肽转移酶（GST ）融合，在原核或真核细胞中表达，将GST-X 应用蛋白纯化技术分离出来，结合到GSH 琼脂糖珠上。然后将另一种蛋白质Y （可通过体外翻译的方法得到， 纯度较高，标记有放射性同位素）加入其中，如果两种蛋白质存在相互作用，则形成GST-X-Y 复合物琼脂糖珠， 被沉淀下来。如果内源性蛋白含量低或者结合力弱，GST 沉淀实验往往难以成功，可采取放射性标记法标记细 胞蛋白，通过放射自显影检测相互作用蛋白。该实验须选择合适的细胞及细胞状态。有些蛋白质的相互作用会受 到细胞类型、细胞状态、外界刺激因素等条件的影响。