题目：复合细胞支架的制备及其在药物筛选中的应用

三维立体细胞培养结合HPLC在线筛选中药活性成分，是近年来发展起来的一种非常重要的药物筛选模型。复合细胞培养支架的制备在生物医药材料领域，已经引起了广泛的关注，复合支架能够整合不同组分的优点而克服各自的缺陷。壳聚糖、纳米羟基磷灰石和丝素蛋白由于具有良好的生物相容性，广泛地被用作细胞支架制备的原材料。但单一组分支架均由于材料自身的一些缺陷，阻碍了它们的应用和发展。壳聚糖的降解过程不易控制，机械性能欠佳；纳米羟基磷灰石虽具有较好的机械强度，但降解速度过于缓慢；丝素蛋白也具有高的机械强度，但易于降解。若将几种材料基质复合，制备复合支架，有望克服单一材料的缺陷，获得既具有良好的生物相容性和机械强度，又具有合理的可降解特性的理想支架。
该研究的主要目的就是制备一种新型的三组分复合多孔细胞支架，通过与二组分支架的对比比较，考察了三组分支架的体内体外生物特性。同时将制备的三组分支架用于培养MG-63人骨肉瘤细胞，筛选山茱萸中与细胞作用的几种活性成分。本论文研究内容主要包括以下三个方面:
1. 壳聚糖/丝素蛋白/羟基磷灰石支架的制备与表征
以冷冻干燥结合溶剂浇注-粒子沥滤技术，采用粒径大小固定的NaCl微球为致孔剂，将含有壳聚糖（CS），丝素蛋白（SF），纳米羟基磷灰（nHA）的三种材料基质复合制备出三组分多孔支架，将其命名为CS/SF/nHA 。在制备过程中，通过致孔剂（氯化钠盐）来控制孔的大小和结构，从而获得孔径结构可调的复合多孔支架。为了评价考察CS/SF/nHA 三组分细胞支架的一些特性，同时又制备了三种二组分的细胞支架，分别为CS/nHA、CS/SF、nHA/SF作为对照实验组。试验考察了复合支架的微观形貌与孔径之间的关系，并对支架的孔隙率做了简单的评价。动态粘弹谱仪（DMA）对支架的力学性能进行了考察评价，同时模拟体内微环境探究了支架的降解特性，通过以上实验技术为了说明材料的组成成分对支架性能的影响。此外还考察了支架与MG-63人骨肉瘤细胞之间的生物相容性，用MTT法测试细胞在支架上的增殖情况，同时辅助荧光染色分析，进一步说明该支架的良好生物相容性。最终考察了MCF-7人乳腺癌细胞在三维立体支架（CS/SF/nHA）培养模式下筛选山茱萸中与细胞作用的一些活性成分。
2. 壳聚糖/丝素蛋白/羟基磷灰石支架与二组分支架的性能比较分析 
    通过与二组分对比分析得出：三组分支架CS/SF/nHA具有良好的通透性和微观孔结构，孔径均一，尺寸在100-300 um之间，致孔剂密堆积排列，且与二组分支架在微观形貌上没有差异性。此外CS/nHA、CS/SF、nHA/SF、CS/nHA/SF多孔支架的孔隙率均能达到90% 以上，且支架的降解过程能够满足生物医药材料的基本要求；机械强度测试结果表明三组分支架明显优于二组分支架；通过与MG-63细胞之间的生物相容性试验表明，细胞在支架上能够粘附与增殖，然而三组分支架CS/nHA/SF更有利于促进细胞的粘附与增殖。
将三组分支架CS/SF/nHA作为细胞支架，培养MCF-7人乳腺癌细胞，结合高效液色谱分析，筛选中药山茱萸中与细胞作用的几种活性成分，通过色谱峰面积的变化，计算得到三种水溶性成分：山茱萸苷、獐牙菜苷和马钱素与细胞作用过程的结合度大小，从而为三维立体细胞培养药物筛选奠定一定的实验基础。