● 摘要
分类学使人们认识事物的基础学科，昆虫分类学是进行昆虫学研究的基础。传统的分类方法主要是以昆虫的外部形态为依据，侧重于观察和描述。随着科学技术的进步，昆虫综合分类学概念的提出，为古老的分类学注入了新的活力，他强调要在总结从各相关学科获得分类性状的基础上进行综合、全面地分析。近二十年来，生化技、细胞遗传学和分子遗传学的迅猛发展，使人们能够从微观领域进一步研究昆虫分类学。现代生物学指出物种不是一个静止、确定的实际单元，种群则是生存进化的基本单元，种群内同时存在着不断的遗传变异，发展到一定程度就会体现出表型上的差异，继而会形成在形态、生理、行为等方面的不同品系；无脊椎动物较脊椎动物具有更大的遗传多样性或变异性。正是存在这些用传统分类方法解决不了的问题，为分子生物学技术的应用研究提供了用武之地，昆虫分子系统学方面的研究已全面展开。 随机扩增多态性DNA(RAPD)技术是近几年发展起来的一种DNA多态性检测技术，它可在对物种从未进行过任何分子生物学研究的基础上开展DNA多态性分析，它具有检测效率高、简洁、灵敏，对材料要求不高、取材少、成本低等特点，已被广泛应用于遗传学、分子进化学和生物分类学诸领域，在昆虫分类学和昆虫分子系统学的研究中已得到了应用。螽蟖隶属昆虫纲、直翅目、螽蟖科，是一类重要的昆虫。在其综合分类研究方面，仅就部分属种进行染色体技术，酯酶同工酶技术的研究曾有过报道，而应用分子生物学技术进行螽蟖科昆虫的综合分类研究方面国内、国外均未见报道。因此，本文应用RAPD技术对螽蟖科部分属中昆虫的DNA多态性进行了初步研究，为其综合分类提供分子生物学以依据，所确立的从昆虫基因组DNA的提取到RAPD扩增的全部技术路线为今后开展相关研究奠定了一定的基础。 本文首先进行了昆虫基因组DNA提取技术的方法研究，确定了昆虫基因组DNA提取的标准技术路线，已成功应用于直翅目、鞘翅目、蜻蜓目等昆虫及人类（如胎膜）基因组DNA的提取，作为模板亦可用于RAPD扩增。该技术简便、易操作、适用范围广，可用于任何研究目的。其次，利用标本保存方式不同和取材部位的不同开展了昆虫基因组DNA提取技术的材料学研究，结果表明除了利用活体标本、体液、冰冻（－50℃）标本酒精浸渍标本均可提取得率较高、纯度较好的基因组DNA外，也可由烘干标本、针插干标本中得到基因组DNA，且均可作为模板成功用于RAPD扩增。昆虫的不同体段对基因组DNA的提取效果影响不大，但在利用大型昆虫材料的胸、腹部肌肉是应注意剔净杂质。此研究对我们今后扩大标本的采集范围和简化标本的采集手段，甚至在利用前人采集的标本开展全面的、系统的分子系统研究等方面均有一定的现实意义。最后，随机选用了十条10个碱基对（bp）的引物，采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对分属于三亚科八属十种螽蟖昆虫的DNA多态性进行了初步研究，结果表明，在不同类阶元中普遍存在RAPD扩增片断多态性，种间多态性大于钟内，种下变异（如体色不同的生物型）可准确检出，雌雄差异一般对种内特异性扩增片段无影响。 因此，RAPD技术宜用于确定近缘物种或种群的亲缘关系，只有对不同种群、不同生物型、不同种的个体进行广泛的多态性分析后，方可通过建立一套检索系统来确定各物种的分类地位。而且RAPD作为一种技术，其本身是稳定的。只要严格控制反应条件，就可获得更具重复性的结果。随着实验技术和统计分析方法的日益完善，RAPD技术必将更广泛的应用于昆虫分类学、昆虫系统学的研究中，为人们提供准确可靠的综合分类信息。