题目：磁场结合顺铂对肿瘤细胞K562杀伤效应机制的初步研究

摘要 目的：研究稳恒磁场联合顺铂对K562细胞杀伤作用的机制；用免疫印迹（western blotting）检测磁场处理前后K562细胞Cyclin B1表达量的变化。
 
方法：
1. MTT法检测顺铂联合磁场对K562细胞（人红白血病细胞）活性的改变。2. 磁场联合顺铂作用于K562细胞后，通过光学显微镜、原子力显微镜观察细胞形态的变化；流式细胞仪分析检测细胞周期分布的变化；单细胞凝胶电泳（SCGE）检测细胞DNA的损伤。3. 用western blotting检测同步化K562细胞各周期时相中Cyclin B1的变化趋势；4. 磁场处理K562细胞后，用western blotting检测Cyclin B1蛋白含量的变化。
 
结果：
1. K562细胞以1×105cells/mL的细胞密度接种，MTT检测结果表明，磁场联合10μg/mL顺铂处理K562细胞12h后，细胞活性受到显著抑制。
2. 磁场联合10μg/mL顺铂处理K562细胞12h后，光学显微镜观察细胞形态发现，磁场联合顺铂组细胞碎片较多。原子力显微镜观察发现，磁场联合顺铂组细胞表面出现较大的孔洞。流式细胞仪检测细胞周期分布发现，磁场可将细胞阻滞于G2/M期；顺铂可将细胞阻滞于S期；顺铂联合磁场处理细胞12h后，大部分细胞被阻滞于S期。SCGE检测的结果表明，磁场协同顺铂作用于K562细胞可以增加细胞DNA的损伤。原子力显微镜观察磁场与顺铂共同作用于K562细胞后，其DNA的结构变化，发现联合处理组DNA交联及断裂均增加。
3. 用western blotting检测Cyclin B蛋白的周期变化，结果表明，K562细胞Cyclin B从S期初期开始表达，随后逐步升高，在G2/M期达到最高点，进入M期后迅速降低。
4. 磁场分别处理K562细胞12h、24h、36h后，用western blotting检测Cyclin B含量变化，发现磁场处理组与对照组相比，Cyclin B1蛋白表达量没有显著变化。
结论：
1)磁场结合抗肿瘤药物（顺铂）在一定条件下对K562细胞有协同杀伤效应，主要表现在细胞形态受损、细胞周期分布改变与细胞DNA损伤增加。2)磁场分别处理K562细胞12h、24h、36h后，western blotting检测细胞Cyclin B1含量的变化，发现磁场处理组Cyclin B1表达量与对照相比无明显变化。