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一、名词解释

1． 抑制剂。

【答案】抑制剂是指能使酶的某些必需基团或酶活性部位中的基团的化学性质改变，而降低酶的催化活性，甚至使酶的催化活性完全丧失的物质。

2． A 位点（aminoacylsite ，acceptor site）和 P 位点（peptidyl site）。

【答案】A 位点即氨酰基位点，是新掺入的氨酰

是延伸中的肽酰

3． 的二面角。

用. 表示；绕Ca-C 键轴旋转的角度常用表示，它们被称为单位的相对位置。

4． 一碳基团。

【答案】一碳基团是指在代谢过程中，某些化合物可以分解产生的具有一个碳原子的基团。在一碳基团转移过程中起辅酶作用的是四氢叶酸。许多氨基酸的代谢过程与一碳基团的代谢有关，嘌呤与胸腺嘧啶的生物合成也与其密切相关。

5． 糖异生（gluconeogenesis ）。

【答案】糖异生是指非糖物质在细胞内净转变成葡萄糖的过程。

6． 凝胶过滤层析。

【答案】疑胶过滤层析又称分子排阻层析，是一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其他分子混合物的层析技术。

7． 脂类（lipids ）

【答案】脂类是指脂肪、类脂及其衍生物的总称。

8． 神经节苷脂（gangliosides ）。

【答案】神经节苷脂是由神经酰胺和至少含有一个唾液酸残基的寡糖组成，寡糖链与神经酰胺Q 上的羟基以糖苷键相连，主要存在于大脑灰质和神经节细胞。

第 2 页，共 33 页 的结合位点；P 位点即肽酰基位点，的结合位点。 【答案】多肽链中，和都是单键，可以自由旋转。其中，绕的二面角。键轴旋转的角度常连接的两个肽的二面角决定了由

二、问答题

9． 现有600mg 分子量为132000的寡聚蛋白质，在弱碱性下进行2，4，-二硝基氟苯反应，反应完全后进行完全水解，发现含有5.5mg 的DNP-异亮氨酸（C11H1606N3）。问该蛋白质有多少条肽链？

【答案】DNP-异亮氨酸的分子量约为286。

（1）水解获得的DNP-异亮氨酸的毫摩尔数为5.5/286。由于2, 4-二硝基氟苯只与游离氨基端反应，所以600mg 的该寡聚蛋白质的肽链的毫摩尔数为5.5/286。

（2）该寡聚蛋白质的毫摩尔数为600/132000, 所以蛋白质所含的肽链的数目

为

4

10．在很多酶的活性中心均有His 残基参与，请解释。

【答案】酶蛋白分子中组氨酸的侧链咪唑基pK 值为在生理条件下，一半解离，一半不解离，因此既可以作为质子供体（不解离部分），又可以作为质子受体（解离部分），既是酸，又是碱，可以作为广义酸碱共同催化反应，因此常参与构成酶的活性中心。

11．丙酮酸是一个重要的中间物，简要写出以丙酮酸为底物的5个不同的酶促反应。

【答案】丙酮酸是一个重要的中间代谢物，其去向随机体所处条件而异，不仅能直接参与糖类代谢，还可以间接参与脂类和蛋白质代谢等。

12．蛋白质和氨基酸分解代谢所产生的氨有哪些出路？在动物体内和植物、微生物体内有何不同？

【答案】

由蛋白质和氨基酸分解代谢所产生的

物体内，

用的

既是废物，又是氮源。在植物和某些微生贮存于体的能力，但重新利

作为氮源而贮存占很重要的地位，主要是生成谷氨酰氨和天冬酰胺将内，再用于嘌呤、嘧啶、氨基酸的生物合成。人和动物也有上述重新利用仅占代谢中所产生的游离的少部分。游离氨是有毒物质，脱氨作用所产生的氨在动物体内不能大量积存，绝大部分是向体外排泄。各种动物排氨的方式不同，有的动物如鱼类可直接排氨，有的动物则要把氨转变成其他形式的含氮化合物再排出体外，如鸟类排尿酸，人和其他哺乳动物在肝脏中经鸟氨酸循环将氨转变成尿素后再排出体外。

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13．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？

如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？

你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的

种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条

小的条带。这一次染色方法是什么？为什么

会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？

【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。

（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。

（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。

为了将的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，可使用凝胶过滤层析。的核糖核酸酶应该先流出来。

14．蛋白质的氨基酸排列顺序和核酸的核苷酸排列顺序，生物功能有怎样的关系? 蛋白质的氨基酸排列顺序和它们的立体结构有什么关系？

【答案】蛋白质的一级结构是由基因编码的。蛋白质的氨基酸排列顺序总体而言是由基因中的核苷酸排列顺序所决定的。然而，在有相当数量的基因在转录成mRNA 后，以及在翻译为肽链后，在这两个不同水平上还存在着后加工，包括转录后加工和翻译后加工，因此成熟蛋白质中的氛基酸顺序和基因中的核昔酸顺序不一定是对应的。蛋白质的立体结构在很大程度上由氨基酸序列所决定，但是也不能忽略环境因素对蛋白质立体结构的影响，如疯牛病发生时，相同氨基酸顺序的肽链却产生了不同的立体结构。

蛋白质的生物功能与蛋白质的立体结构密切相关，在通常的生理条件下，可以认为蛋白质的氨基酸顺序决定了蛋白质的立体结构，进而决定了蛋白质的生物学功能

第 4 页，共 33 页 大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这