● 摘要
随着抗肿瘤研究的深入，中草药、植物药中广泛存在生物活性物质，因具有不良反应少、遗传毒性低等优点，越来越多的受到国内外学者的关注。它们中的大多数可以激活人的天然免疫系统，因此可以作为肿瘤治疗的辅助手段开发利用，是当前防治肿瘤新药研发的热点。
本论文研究对象为担子菌门桦菌芝，其药用部位为子实体, 味微苦，性平， 药用功能主要为退烧，消炎，止痛，抗肿瘤和治疗小儿积食。其作为民间药物历史悠久，可用于治疗食管癌、胃癌、子宫癌。目前，很少有关于桦菌芝抗癌活性研究的报道。
本论文将高效液相色谱技术运用于分级分析了桦菌芝乙醇提取物根据溶剂极性递增法萃取之后的各极性成分组，为进一步进行成分组药用活性的筛选做准备。在对与细胞共孵育时与细胞共存的药物成分的分析研究中，采用高效液相色谱法对其结果进行比对，同时利用体外培养的肿瘤细胞株（小鼠白血病L1210细胞株）对桦菌芝提取物的抗癌活性及抗癌机理进行了进一步的研究。结果如下：
（1）采用C18色谱柱，反相高效液相色谱法，梯度洗脱，对桦菌芝乙醇总提取物（a）、氯仿萃取物（b）、乙酸乙酯萃取物（c）、水饱和正丁醇萃取物（d）进行分析。桦菌芝乙醇总提取物出现17个特征峰，并且随着极性的不同逐渐分配在主要富集亲脂性化合物及生物碱的氯仿，中等极性偏小且富含甾醇类、单糖苷及酚类化合物的乙酸乙酯和中等极性偏大含多糖基苷的水饱和正丁醇中。
（2）MTT法检测了桦菌芝乙醇提取物对L1210细胞存活率的影响，结果显示，桦菌芝提取物抑制了L1210细胞的增殖，不同浓度的桦菌芝提取物作用1×105 cells/ml 的L1210细胞24 h后，桦菌芝提取物以剂量依赖的方式抑制了L1210细胞的增殖，其IC50值为69.35 μg/ml。
（3）采用Hoechst 33342 DNA特异性荧光染料对桦菌芝作用后的L1210细胞进行染色，荧光显微镜观察发现，随着桦菌芝浓度的增加，L1210细胞显示出染色体凝集趋边，出现新月形、马蹄形等细胞凋亡典型特征，在显微水平表明了桦菌芝提取物对L1210细胞有一定的促凋亡作用。
（4）应用流式细胞仪结合Annexin V-PI荧光双染检测桦菌芝作用于L1210细胞24h后细胞凋亡率的变化，结果显示细胞凋亡率与药物剂量呈正相关，提示桦菌芝能够诱导L1210细胞发生凋亡。
（5）利用流式细胞仪结合Rhodamine 123（Rh 123）的染色法检测线粒体膜电位(ΔΨm)水平，结果显示，与对照组相比，药物处理组细胞线粒体膜电位下降，表明线粒体有可能参与了药物诱导的L1210细胞凋亡进程。
（6）利用western bloting 技术研究了桦菌芝乙醇提取物对L1210细胞内源性和外源性经典凋亡相关蛋白通路的影响，对Caspase-3/Caspase-9以及 Bax/Bcl-2，Phosphorate-Erk蛋白的表达进行了分析，得出的结果提示了在这两种凋亡相关信号通路中桦菌芝乙醇提取物对其相关蛋白的表达都有一定的促进作用。
（7）本论文研究了桦菌芝乙醇提取物对从昆明系小鼠采取并分离得到的外周血单个核细胞以及粗提T淋巴细胞生长率的影响，结果显示其对粗提的T淋巴细胞具有较明显的增殖促进作用。MTT法和Viacount法共同佐证了这一结果，在随着药物浓度递增的情况下，外周血单个核细胞以及T淋巴细胞都有一定的增殖活性增高的表现。