● 摘要
番茄和黄瓜是我国广泛栽培的蔬菜种类，若受到病害的侵染，则严重 影响其产量和质量。其中番茄狄霉病、黄瓜霜霉病及黄瓜白粉病是栽培地较为常 见的病害，发生普遍且危害严重，其病原体均为真菌，在发病初期以常规方法难 以诊断，常由于诊断的不及时而造成严重后果。 番茄灰霉病的病原菌是狄葡萄孢(Botrytis cinerea)，黄瓜霜霉病的病原菌为古 巴假霜霉病菌(Pse udoperonospora cubensis)。黄瓜白粉病的病原菌据《中国真菌 志，白粉菌目》记载存在两种，分别为瓜类单囊壳(Sphaerotheca cucurbitae)和 葫芦科白粉菌(Erysiphe cucurbitacearum)，但上海地区致病的病原菌据上海交通 大学农业与生物学院植物病理研究室形态鉴定为Sphaerothecafuliginea。 本项课题从病原菌入手，分析、筛选番茄灰霉病、黄瓜霜霉病及黄瓜白粉病3 种病原菌种特异的分子特征，并建立和评价了分子检测的方法，通过研究取得的 主要结果如下： 1.扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的rDNA－ITS，其序列长度为424bp， GC含量分别为44.8 1％(hm1)，45.28％(hm2／hm3)和45.05％(hm4)。各部分 的界限参照文献确定：位点1－120为部分ITS1，121—267为完整的5.8 S，268-424 为部分ITS2。4个地理株间的序列除ITS1区存在3个位点改变外，其他区域无差 异。灰葡萄孢的rDNA－ITS序列与其10个近缘种进行比对，结果显示：灰葡萄孢 与蚕豆葡萄孢、Botrytis tulipae和Sclerotinia tetraspora相比，差异较小，hm4和蚕 豆葡萄孢、Botrytis tulipae比较分别有1个碱基差异，均分布在ITS 1，ITS2则完 全相同；与Sclerotinia tetraspora相比则有8个位点差异；与其余7个近缘种的差 异较大，序列差异范围分别为0.02 5一0.116(ITS 1)和0.013一0.109(ITS2)。 2.扩增和测定了灰葡萄孢4个地理株的P729片断，长度为618bp，GC含量 分别为47.25％(hm 1／hm3／hm4)和46.76％(hm2)。比较各地理株间以及文献报 道的序列(AJ422 103)差异，显示hm l、hm3与文献报道序列AJ422103完全相l司， hrn2、hm4与之存在差异，分别位于位点180／454／475(hm2)，156／180／518(hm4)。 3.扩增和测定了狄葡萄孢4个地理株的28S—D3，所获序列长度为243 bp，灰 葡萄孢4个地理株的序列完全相同，与Botrytis tulipae的也完全相同；而与 Sclerotinia tetraspora 、Botrytis porri仅有1个碱基差别，与Sclerotinia minor、 Sclerotinia trifoliorum有2个碱基差别。 4.建立了番茄灰霉病的PCR分子诊断方法，并对该方法进行了灵敏性和特异 ，件评价，结果显示引物p729+／p729－所扩增条带对灰葡萄孢均为特异，病原菌为 0.2μg时即可获得诊断。 5.应用巢式PCR扩增黄瓜霜霉病菌3个地理株的rDNA—ITS，扩增片段特异 日效率高，测定的序列长度为709bp，GC含量分别为45.84％(sm l／sm2)和45.70 ％(sm3)。比较各地理株间的序列特征，显示sml和sm2完全相同，sm3在639 付与sm1／sm2存在1个单碱基转换(G／A)。扩增和测定了黄瓜霜霉病菌2个地理 株的28S－D3，序列长度为242bp，GC含量为56.61％，两株的序列完全相同，不 存在碱基差异。 6.应用巢式PCR扩增黄瓜白粉病菌3个地理株的rDNA—ITS，获得的扩增片 段经测序，显示长度为379bp，GC含量为56.73％，包括部分ITSl，5.8S和ITS2。 3个地理株的序列完全相同，无碱基差异，生物信息学分析提示本研究的黄瓜白粉 病病原菌应为Sphaerotheca cucurbiatae，与形念鉴别的结果存在矛盾，可见上海市 包括我国的黄瓜白粉病病原菌的种类鉴别需进一步澄清和确定。