题目：一氧化氮在绿豆侧根发生过程中的作用研究

　　一氧化氮是植物的重要活性分子，大量研究证据表明，它参与了许多 重要的植物生理过程，如生长、发育、病原体防御反应、程序性细胞死亡和胁迫 抗性等。前人曾证明NO参与NAA诱导的番茄侧根发生，但对于侧根发生过程中 NO的时间和空间变化以及NO的来源等问题描述还不清楚口本实验以绿豆为材料， 状不同角度研究了NO在侧根发生中的作用以及IBA、NAA诱导侧根发生的机制， 并对侧根发生过程中NO的来源进行了探讨。结果如下： 　　1．NO供体SNP可有效促进侧根发生，其最适浓度为50μmol／L，浓度高时则 具有伤害效应3。SNP处理时间也可影响生根效果。以50μmol／LSNP处理24小时 生根效果最好。SNP与IBA或NAA混合处理比各自单独处理的生根效果好。NO 清除剂c－PTIO和动物NOS抑制剂L-NAME单独或与IBA和NAA混合处理明显 抑制侧根发生，表明内源NO在侧根发生及其形成中可能起着重要作用，其来源 与NOS有关。 　　2．利用NO特异的荧光探针对对照及IBA和NAA处理侧根发生过程中内源 NO的时空变化进，亍检测，结果表明，对照组伴随着根原基的发育，胚根自下胚轴 基部向根尖方向2mm－4mm区域N O荧光从无到有逐渐增强，0-24h主要分布于中 柱鞘与内皮层细胞中，36h后则主要分布于根原基前端分生组织中。非生根区域无 NO荧光。IBA或NAA处理组较对照组更早检测出NO荧光Q对照与IBA或NAA 处理胚根自下胚轴基部向根尖方向4ram．7ram区域NO产生及分布则完全不同，在 实验期间对照胚根该区域无N O产生，而I BA或N AA处理胚根该区域NO产生、 分布及随时间变化趋势与对照组胚根下2mm－4mm区域基本一致。NO清除剂 c－PTIO抑制所有组根原基的形成。这些结果显示，内源NO在侧根形成中起重要 作用，而且IBA和N AA诱导的侧根发生也是由NO介导的。 　　3．NADPH－黄递酶为NOS标志酶，本实验以该酶组织化学法对侧根发生过 程中的类似动物NOS活性进行检测。结果表明，0～48h，无论对照还是IBA或 NAA处理组，伴随着根原基的发生和发育，胚根下2mm～4mm区域NADPH－黄 递酶活性逐渐增强，且集中分布在中柱鞘与内皮层细胞中，即侧根原基发生部位 及正在形成的根原基中，其它非生根区域基本无阳性反应。在根原基中较强阳性 也集中分布于分生组织中，这与NO的分布一致。与对照相比，相同时间I A或 NAA处理组的NADPH－黄递酶阳性反应略强且出现较早。对照与IBA或NAA 处理组胚根自下胚轴基部向根尖方向4mm一7 mm区域NADPH一黄递酶分布也完 全不同，对照组该区域NADPH一黄递酶活性很弱，而IBA或NAA处理组该区域 NADPH-黄递酶活性、分布及随时间变化趋势与胚根自下胚轴基部向根尖方向 2mm－4mm区域基本一致。L－NAME既抑制所有实验组侧根原基的形成，也降低 NO荧光和NADPH-黄递酶活性。以上结果表明植物中电存在类似于动物的NOS， 而且该酶以及它催化产生的NO在侧根发生过程中起着重要作用。