● 摘要
荚果蕨(Matteuccia struthiopteris (L.) Todaro)隶属于蕨类植物球子蕨科(Onocleaceae)荚果蕨属(Matteuccia),又名黄瓜香、广东菜、荚果蕨贯众等,为多年生草本植物,野生资源丰富,栽培范围较广。荚果蕨幼叶可食用,根状茎可药用,是难得的药食同源植物。荚果蕨含黄酮类、多糖、酚类、萜类、有机酸、蛋白质等多种化学成分,多糖是其中很重要的一类。研究证明,荚果蕨根状茎中多糖具有免疫调节等生物活性。
本论文主要对荚果蕨中多糖的提取工艺、组成分析、抗氧化作用及保肝作用等方面进行了初步研究,以期为开发利用荚果蕨资源提供依据。主要实验结果如下:
(1)采用苯酚-硫酸法测定荚果蕨中粗多糖的含量,结果表明:该方法精密度、稳定性、重复性和加样回收率均良好,是一种可靠的测定荚果蕨中粗多糖的方法。分别对不同地区采集的荚果蕨根状茎、营养叶、孢子叶3个部位中粗多糖含量进行比较分析,结果表明:不同地区荚果蕨3个部位中粗多糖的含量存在较大差异,其中陕西省宁陕县的荚果蕨根状茎中的粗多糖含量最高。对陕西宁陕县采集的荚果蕨根状茎、营养叶、孢子叶3个部位中粗多糖的含量进行比较分析,结果表明:总多糖在不同部位中的分布呈现不均匀性,在根状茎中含量最为丰富。
(2)采用超声波法提取荚果蕨根状茎中粗多糖,通过单因素试验和正交试验得出最佳提取条件为:称取一定量的材料,以1:50(g/mL)料液比加入相应体积的蒸馏水,在80℃、150W功率下超声作用30min,在此条件下,测得粗多糖含量为9.61%。料液比、提取温度、超声功率和超声时间4个因素对粗多糖含量均有极显著影响。采用Sevage法脱蛋白,并对脱蛋白工艺进行优化,实验结果显示脱除6次最佳。所得多糖通过反复透析除去小分子杂质,得到质量较高的荚果蕨多糖,多糖纯度为(70.19±2.18)%。
(3)采用高效液相色谱法分析荚果蕨根状茎中多糖的单糖组成,结果表明:该多糖主要由葡萄糖、半乳糖、木糖3种单糖组成,其中葡萄糖的含量明显高于其他单糖含量。葡萄糖、半乳糖和木糖3种单糖的摩尔比为3.50:1.39:1。荚果蕨多糖为浅黄色粉末,易溶于热水,不易溶于有机溶剂,苯酚-硫酸试剂反应说明为糖类物质。红外光谱分析可知该多糖具有多糖类的特征吸收峰。
(4)选用铁还原力体系、DPPH自由基清除体系、羟自由基清除体系,评价荚果蕨根状茎中多糖的体外抗氧化活性。结果表明:该多糖对羟自由基和DPPH自由基均有一定的清除作用,对Fe3+有一定的还原能力,且呈一定的量效关系。该多糖对DPPH自由基和羟自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为68.68µg/mL,和0.74mg/mL。铁还原能力在0.1~0.5mg/mL浓度范围内随着多糖浓度的增加而增强。
(5)采用经口一次性给予小鼠体积分数为50%的乙醇建造酒精致急性肝损伤小鼠模型,通过检测血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、甘油三酯(TG)水平和肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量等生化指标,探讨荚果蕨根状茎中多糖对肝损伤小鼠的保护作用。结果表明:荚果蕨多糖各剂量组不同程度地对肝脏有保护作用。
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