● 摘要
乙酰胆碱（Ach）是动物和人中枢神经系统内传递神经冲动的重要化学递质。有机磷中毒或患某些疾病会使体液或脑脊液中Ach含量发生变化，因此Ach含量的测定在临床诊断、药物独理研究、军事防化及环保等方面均有很重要的使用价值。目前，已有不少测定ACH和胆碱（Ch）的方法，但各有优缺，如操作复杂、实际一起昂贵、灵敏度不够等。化学发光方式一种简单，高灵敏度的微量及痕量分析方法。本文设计了一种化学发光检测器，把煤从反应与化学发光反应相结合，建立了一种灵敏、特效测定Ach和Ch的化学法光分析新方法，提供了只需数微升酶样品即可对这两种物质进行准确测定的流动注射（FIA）检测手段. 本文共分两大部分，第一部分为综述，总结了1980-1992年度国内外有关测定Ach和Ch的葛洪方法和技术，并对化学分析法中的GC-MS法，酶法分析，HPLC法和化学发光法作了较为详尽地评述。 第二部分为研究报告，从五个方面对Ach, Ch及Glucose的固定化酶流动注射化学发光分析法进行了详尽的研究。 （一）研究并建立流动注射Luminol-Co2+-H2O2化学发光体系测定H2O2的检测系统，该系统具有简单、快速、灵敏、实际便宜等优点，对H2O2的测定线性范围为1×10-6mol/l~1× 10-5mol/l;检测限为2.4 ×10-9mol/l;RSD ≤2.6%. （二）分别采用凝胶物理包埋法和共价偶联法两种方法将葡萄糖氧化酶(GOD)固定在六种不同的载体上，并制成酶柱，通过实验对个酶柱在流动注射体系中的性能进行对比研究。结果表明，固定化酶的制作方法 ，载体的选择都直接影响着流动注射酶法分析的灵敏度，准确度和分析速度。以聚丙烯酰胺凝胶和海造酸钙凝胶物理包埋法制得的酶柱活性较低，稳定性有好有差，但机械强度均很差，因此酶柱阻力大，分析速度慢。以壳聚糖凝胶为载体的共价偶联酶柱，虽然活性最高，但稳定性、机械强度均很差，不适于FIA体系，以3-氨丙基多孔硅胶为载体的固相酶，虽然在机械强度、活性及FIA实用性方面比前三者要好，但稳定性较差。而以3-氨丙基-三乙氧基贵烷多孔玻璃为载体的固相酶柱，不仅活性高，传质阻力地、分析速度快，是一种较为理想的固定化酶柱，特别适用于流动注射分析体系。 （三）将胆碱氧化酶（Cho）共价偶联与氨基化多孔玻璃（CPG-NH2）上制定固定化酶柱，结合Luminool-Co2+-H2O2化学发光体系，建立了测定胆碱固定化酶流动注射化学法光分析方法。该方法的线性范围为1pmol-10pmol,检测限为500fmol,相对标准偏差小于2.6%.本法成功的应用于人血红细胞和猪胆汁中胆碱含量的测定，每次取样量仅100ul,一分钟左右即可得出结果，回收率在92-108%之间。 （四）将乙酰胆碱酯酶（AChE）用同样方法固定于CPG上，采用AChE和CHO双酶柱系统， Luminol-Co2+-H2O2发光体系，建立了测定Ach的流动液射化学发光分析法。方法线性范围为1pmol~1nmol,检测限为600fmol,相对标准偏差小于3.7%。用本方法对几种病人血清及鼠脑中的Ach进行了测定，结果与文献基本一致，回收率为92.5~108.3%. （五）本研究汉采用CPG共价偶联GOD酶柱，Luminol-Co2+-H2O2化学发光体系，建立了一种新的流动注射化学发光测定葡萄糖的方法，线性范围0.01~10ug/ml,检测限为2ng/ml（比前人的方法第一个数量级），相对标准偏差