题目：DEHP对中国林蛙精巢中StAR、CYP17和CYP19

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate, DEHP)属于邻苯二甲酸酯类化合物(phthalic acid esters, PAEs)，是一种重要的酯类环境雌激素，可导致脊椎动物生殖功能下降，能够扰乱生物机体内正常的内分泌生殖功能。类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein，StAR）、细胞色素P450c17酶和芳香化酶（Cytochrome P450 Aromatase，P450arom）在类固醇激素合成过程中起关键性调节作用。DEHP是否通过影响两栖动物精巢中StAR、CYP17和CYP19基因的表达而干扰类固醇激素的合成，目前未见报道。本实验将中国林蛙（Rana chensinensis）雄性成体暴露于10-7、10-6、10-5、10-4mol?L-1 DEHP水体20d、30d、40d后，取其精巢，用实时定量PCR对StAR、CYP17和CYP19基因mRNA进行定量分析，用免疫组织化学方法检测StAR、P450c17和P450arom蛋白在精巢中表达。结果如下：

1.提取总RNA，用琼脂糖凝胶电泳检测，出现5S、18S、28S三条带，证明RNA样品完整；测定RNA的OD值，得到OD260/OD280比值为1.9，在1.8-2.0之间，证明最终提出的RNA样品符合实验要求。用RT-PCR方法扩增了273bp的StAR、300bp的CYP17和322bp的CYP19 cDNA序列。并成功扩增出115bp的β-actin cDNA序列。

2.荧光实时定量PCR方法检测StAR mRNA的表达水平结果显示，与对照组相比，大部分DEHP浓度组的StAR mRNA表达相对值均极显著增高。比较不同DEHP浓度组，在暴露20d、30d时，StAR mRNA的表达相对值均随着DEHP浓度的增高而降低，而暴露40d时，StAR mRNA表达相对值与DEHP浓度之间的关系并不规律。

大部分DEHP处理组CYP17 mRNA的表达值与对照组相比均极显著下降。CYP17 mRNA表达相对值随着暴露时间延长而呈现降低趋势，与DEHP浓度之间的关系规律性不强。

各DEHP浓度组的CYP19 mRNA表达相对值与对照组相比均极显著增高。CYP19 mRNA表达相对值随暴露时间的延长而变化的规律性不强，随DEHP浓度变化的规律也不明显。

3.免疫组织化学检测，StAR、P450c17和P450arom蛋白的阳性表达主要存在于Leydig细胞中，而生精细胞和支持细胞中较少。