题目：酶活性的发光分析研究

酶是一种高效、专一的生物活性催化物质。它是构成生命活动的最重要的因素。机体内的各种物质代谢、能量传递、信息转录、神经传导、免疫调节、细胞衰老以及生长发育等都有酶的参与。由此可见，酶活性分析与医学科学及分子生物学的研究密切相关，它以渗入到生理生化基础理论的研究及工农业生产实践中。随着生命科学地发展，酶活性分析愈来愈引起各方面的重视。它在医疗卫生、临床检验、环境保护、国防事业等方面日益显示出重要作用。 在酶活性的各种测定方法中，荧光法以其灵敏度高、选择性强而备受分析工作者的青睐。尤其值得一提的是：基于酶催化无荧光的致酯水解成为强荧光的醇或胺原理的荧光分析法，在水解酶活性的测定中应用十分广泛。从大量的文献可以看出，荧光法测酶活性的主要工作是寻找灵敏、专一、强水溶性、稳定的底物，并且底物被酶水解后，产物具有长波激发发射、高荧量子产率和较大斯托克夫位移等特点。为此，本是研究赵忠从这个目的出发，选择了几种量子产率较高的荧光物质，将其制备成羧酸酯和磷酸酯，用于测血清胆碱酯酶(CHE)和磷酸酯酶(ALP)的活性，为将研究发展为上商品化试剂盒打下了基础。 本文的第一部分主要介绍了荧光素二乙酯(FDA)、二丁酯(FDB)、二磷酸酯(FDP)、二溴荧光素二乙酯(DBFDA)、二磷酸酯(DBFDP)、4-甲基伞形酮丁酸酯(4-MUR)、磷酸酯(4-MUP)这七种荧光物质酯类的合成方法，这些合成方法具有线路简单、操作方便、产率大、产平纯度高等特点，并且可以推广应用至大多数带有羟基的荧光试剂和光度试剂的羧酸酯、磷酸酯及其它酯类的合成。经花粉试验、酶水解实验体外细胞培养实验的证明，所合成的产品是水解酶类较为理想的底物。 本研究工作的第二部分对上述合成产品中的乙酸酯、丁酸酯用作血清CHE底物的可行性进行了考察，结果证明， 四中羧酸酯均可作CHE为的底物。依据于米氏常数Km值，他们对CHE适应程度好坏依次为：FDB>4-MUB>DBFDA>FDA.用FDB、FDA、DBFDA作底物可测出稀释256倍血清中的，而4-MUB只能测出稀释64倍血清中的CHE。由此可见，荧光素及其衍生物的酯类比伞形酮酯类作底物测CHE的灵敏度要搞一些。除此之外，还探讨了依据于水解产物ThCh熄灭荧光素的原理用荧光熄灭法测CHE活性的可能性，虽然只作了一般性的研究，但结果仍证明这种方法是可行的。根茎光速公厕刘春的灵明度可以推测，此法测CHE活性的灵敏度仍会提高。 在第三部分主要研究江荧光素磷脂酸(FDP)、4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)应用于血清活性的测定。并将他们与分光光度法作了比较。用4-MUP作底物可测出6.8*10-6 1.7*10-3IU/mlALP，检出限为9.35*10-7IU/ml，相对标准偏差为0.22%；用作底物可测出2.4*10-6~1。2*10-3IU/ml的ALP，检出限为2.7*10-7IU/ml，相对标准偏差为0.23%。将前者于金氏法作了比较，两者相对误差为3.5%，结果令人满意。