● 摘要
摘要
槐米、别名槐籽，是豆科植物槐（Sophora japonica L.)的干燥花蕾，具有抗氧化，防癌，镇痛，抗自由基，抗衰老，抗过敏，抗炎等活性，同时，具有润肠通便、清热、解毒的功效，在消炎及补肾等方面有一定的防治作用，另外，槐米对人体无致癌、致突变的作用。目前，对槐米多糖的研究只限于提取工艺及脱蛋白方法的选择，对其他方面还鲜见报道。本论文以干燥的槐米为原料，不仅探究了槐米多糖的超声波辅助提取工艺，还对槐米粗多糖的抗氧化活性、分离纯化等进行了初探。本论文主要研究内容及结论如下：
（1）以槐米为原料，采用超声波辅助提取法提取槐米多糖，探讨超声功率、料液比、超声温度、超声时间对槐米多糖得率的影响，在单因素试验的基础上，采用响应曲面优化提取工艺条件。研究表明，槐米多糖的最佳工艺条件为：超声功率为320W、料液比为1:21（W/V=g/mL）、超声温度为32℃、超声时间为40min，该条件下多糖得率为1.52%；参照文献在最佳条件下采用热水浸提法所得槐米多糖得率为1.25%。因此，超声波提取法比热水浸提法所得槐米多糖得率提高了21.6%。
（2）以热水浸提法所得的多糖为研究对象，选蒸馏水、盐（NaCl）溶液（0.1mol/L~0.5mol/L，0.1mol/L为一个梯度）、碱（NaOH）溶液（0.1mol/L~0.5mol/L，0.1mol/L为一个梯度）为洗脱剂进行线性梯度洗脱；过DEAE-52纤维素柱得到经蒸馏水、0.1mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl、0.2mol/LNaOH、0.3mol/LNaOH洗脱的五个组分，依次命名为FSP1、FSP2、FSP3、FSP4、FSP5。以蒸馏水作为洗脱剂，各组分分别过SephadexG-100凝胶柱层析分离达到高纯化的目的。
（3）高效液相色谱法分析得多糖组分FSP1、FSP2、FSP3、FSP4、FSP5的分子量分别为2.9×104Da、9.7×103Da、9.9×103Da、2.6×104Da、3.7×104Da，且均为纯品。
红外光谱扫描得槐米多糖的五个组分FSP1、FSP2、FSP3、FSP4、FSP5分别在波长3448cm-1、3442cm-1、3448cm-1、3393cm-1和3316cm-1处出现宽又强的吸收峰，是-OH伸缩振动所产生的峰，即在多糖分子中存在醇或酚羟基（-OH）；五个多糖组分分别在波长2813cm-1、2813cm-1、2814cm-1、2813cm-1和2812cm-1有一个较弱的吸收峰，是C-H的伸缩振动所产生的吸收峰，即在多糖分子中存在甲基或者亚甲基；五个多糖组分均在波长1600cm-1有一个尖尖的吸收峰，是由C=C，C=O引起的吸收峰，即在多糖分子中存在不饱和键；五个多糖组分分别在波长1383cm-1、1349cm-1、1349cm-1、1349cm-1和1383cm-1存在吸收峰，是多糖分子中存在甲基或者亚甲基C-H变角振动引起的；FSP1、FSP3分别在波长1125cm-1、1128cm-1处的弱吸收峰指认为C-O-H、C-O-C伸缩振动，即多糖分子中存在羧基-COOH或吡喃环中存在醚键；五个多糖组分分别在波长766cm-1、765cm-1、765cm-1、765cm-1和766cm-1处的峰，表明多糖的糖链是由吡喃的对称环伸缩振动所引起的。
GC-MS检测经过水解、衍生的纯品，从NIST11谱库进行检索从而得知， FSP1由D-鼠李糖与D-呋喃半乳糖组成，FSP2由β-D-甘露糖与α-D-吡喃葡萄糖组成，FSP3由D-呋喃半乳糖与D-吡喃葡萄糖组成，FSP4由半乳糖与D-鼠李糖组成，FSP5由D-山梨糖与D-鼠李糖组成，匹配度均在80%以上。
（4）采用还原能力、超氧阴离子自由基(O2–·)的清除能力、DPPH自由基的清除能力、羟自由基(·OH)的清除能力作为体外抗氧化作用评价的四个指标，并与VC、BHT进行比较。结果表明，超声波辅助提取法所得槐米多糖的抗氧化活性高于水提多糖，别介于VC和BHT之间。由此可见，槐米粗多糖有一定的抗氧化活性，而且不同提取方法得到的槐米多糖有不同的抗氧化活性。