题目：苯硼酸功能化材料在糖蛋白分离分析中的应用

糖蛋白是蛋白质最重要的翻译后修饰之一，在分化、发育、细胞与基质间的识别、信号传导及癌症的发生与转移中发挥重要作用。目前发现多种癌症相关生物标志物为糖基化蛋白质，许多糖蛋白为癌症的临床诊断、进程检测、预后评估提供了重要信息。因此糖蛋白的研究对于临床疾病早期诊断以及生物标志物的发现等具有极其重要的意义。但是，复杂生物体系中糖蛋白的绝对丰度较低，不易直接检测，已成为当前糖蛋白质组学研究面临的瓶颈之一。因此，研究糖蛋白的分离、富集和分析具有重要意义。本课题以聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA)微球为载体，通过表面改性和修饰，合成了苯硼酸功能化的微球，用于分离富集复杂生物样品中的糖蛋白。

本论文主要包括四个部分：

(1) 绪论

首先对糖蛋白的概念和研究意义进行了阐述；然后对糖蛋白的分离富集的主要方法从基本原理、研究现状和各种方法的特点做了比较全面的分析；最后就糖蛋白的分析检测方面，列举了常用的几种分析检测手段，并对各种分析方法进行了概述。

(2) 通过SI-ATRP制备硼酸功能化微球及其应用

以PGMA微球作为载体，通过SI-ATRP在其表面接枝聚合4-乙烯基苯硼酸，制备了苯硼酸功能化微球。采用红外光谱(FT-IR)和多功能成像光电子能谱(XPS)对其结构进行表征，通过平衡吸附实验对苯硼酸功能化微球的吸附性能进行考察，并对溶液pH、吸附时间等吸附条件进行了优化。将制备的苯硼酸功能化微球作为固相萃取吸附材料，结合质谱技术，对蛋清和人血清中的糖蛋白进行了分离富集和检测。质谱结果显示，制备的苯硼酸功能化微球能够用于复杂生物样品中痕量糖蛋白的分离富集。

(3) 硼酸荧光探针对糖蛋白的识别特性研究

以单分散的PGMA微球为载体，在其表面修饰硼酸荧光探针，使其作为具有荧光特性的材料用于检测糖蛋白。采用FT-IR和XPS对固载了硼酸荧光探针的PGMA微球的表面结构进行了表征。通过对糖蛋白和非糖蛋白的荧光识别，对PGMA-QPBA的荧光识别性能和选择性进行了评价，并考察了pH对PGMA-QPBA荧光识别糖蛋白性能的影响。结果表明，固载后的载体对硼酸荧光探针的光学性质并无明显影响，保持了游离硼酸荧光探针的荧光特性。固载的荧光硼酸探针对糖蛋白有良好的荧光识别性能，并可以在生理条件下有效地选择性荧光识别糖蛋白。

(4) 基于荧光硼酸的糖蛋白分子印迹聚合物的制备及其应用

以PGMA微球为载体，在其表面接枝硼酸荧光探针，基于硼酸亲和作用，以辣根过氧化物酶(HRP)为模板分子，采用表面印迹技术制备分子印迹荧光聚合物微球(HRP-MIP)。通过FT-IR和XPS对MIP的表面功能基团进行了表征，并探讨了HRP-MIP的选择性识别能力。该分子印迹微球的制备方法简单，反应条件温和，制得的分子印迹微球对模板糖蛋白有选择性识别性能，可直接采用荧光法检测人血清样品中的目标糖蛋白。与传统的质谱法或色谱法检测相比，避免了繁琐的样品处理过程，简化了操作过程，大大提高了分析速率。