● 摘要
背景与目的
胃癌（Gastric cancer）是一种常见的消化道恶性肿瘤，全球癌症发病率位居第四，病死率位居第二，严重影响人类健康水平提高。在我们部分地区，胃癌属高发性恶性肿瘤。传统诊断方法有：钡餐造影X射线诊断、内镜超声诊断、纤维胃镜检查和CT检查等，但是，这些方法灵敏性较差，对于瘤体较小的肿瘤极易造成漏检，使患者失去最佳治疗时机。胃癌传统治疗以外科手术及化、放疗为主，其效果不佳且毒性极大，均存在过度治疗的情况，使许多胃癌患者的临床处理面临困境。目前，随着噬菌体展示技术（Phage Display Technology）的提出和发展，胃癌靶向多肽的筛选已成为胃癌分子诊断及靶向诊疗的新手段。胃癌靶向多肽可被荧光素/放射性元素标记为多肽探针，结合分子影像学技术可有效提高早期胃癌（EGC）检出率；胃癌靶向多肽也可与抗癌药物或纳米颗粒偶联，对胃癌进行靶向治疗，提高药效、减少毒性。
胃癌早期诊断能极大程度上提高临床治愈率及5年生存率，而胃癌的靶向治疗在增强疗效的基础上也大大降低了毒性。本研究是在前期筛选出与胃腺癌细胞SGC-7901特异结合较好的两个噬菌体克隆（GSP3，GSP5）的基础上，进一步确定这两个噬菌体克隆的亲和力和特异性，并合成多肽，多角度确定其特异性/敏感性，为其用于胃癌临床分子影像学诊断及靶向治疗的研究奠定基础。
方法
本研究前期利用噬菌体随机十二肽库（Ph.D.-12Phage Display Peptide Library），以人胃腺癌细胞SGC-7901为靶细胞，人胚肾细胞HEK293为非特异性吸附细胞，依照本照实验室改良的Bio-Panning方法，在体外进行四轮全细胞差减筛选，获得两个与胃癌细胞亲和力较好的噬菌体克隆（GSP3和GSP5）；在此基础上利用细胞/组织荧光免疫法及免疫化学法鉴定阳性噬菌体克隆与SGC-7901/临床组织特异性/敏感性；将特异性最佳克隆序列合成多肽探针Gast probe，在细胞/组织水平利用激光共聚焦扫描显微镜对比荧光强度、流式细胞仪检测特异性、MTT测试细胞增殖；用细胞膜特异性探针定位多肽与细胞结合位点。
结果
1. 细胞免疫荧光法鉴定结果显示阳性噬菌体克隆GSP5是与SGC-7901特异结合最佳噬菌体多肽；2. 合成多肽探针Gast；3. FITC标记的多肽探针与SGC-7901及组织有较好的特异性/敏感性；4. 未标记多肽对SGC-7901增殖没有抑制作用；5. 多肽探针与SGC-7901细胞的结合位点位于细胞膜表面。
结论
多肽探针Gast对SGC-7901细胞/胃癌组织有较好的特异性/敏感性，该多肽结合位点可能是胃癌细胞膜表面某一类受体。该多肽有望做为分子导向肽，与标记物或抗癌药物偶联，以期在早期胃癌分子影像学诊断及靶向治疗方面发挥作用。