2018年华北理工大学生命科学学院904分子生物学之现代分子生物学考研强化五套模拟题
● 摘要
一、名词解释
1． DNA 复性（DNA renaturation）
【答案】DNA 复性是指DNA 双螺旋变性后的两条互补单链重新恢复成双螺旋结构的过程。
2． Transcriptome
【答案】转录组。转录组是指一个活细胞所能转录出的所有niRNA ，即基因组DNA 转录的基因总和。研究转录组的一个重要方法是利用DNA 芯片技术检测机体中基因组的表达。
3． 单核哲酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）
【答案】单核苷酸多态性是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA 序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。SNP 所表现的多态性只涉及单个碱基的变异，这种变异一般由单个碱基的转换或颠换引起。
4． 转录后加工（post-transcription processing）
【答案】转录后加工是指新合成的较大的前体RNA 分子，经过进一步的加工修饰，转变为具有生物学活性的、成熟的RNA 分子的过程，主要包括剪接、剪切和化学修饰。
5． 突变
【答案】突变是指由自身或环境因素导致的DNA —级机构的改变，主要包括碱基的增添、缺失或改变等，染色体结构的畸变也会导致DNA 的突变。
6． 反式作用因子
【答案】反式作用因子是指通过直接结合或间接作用于DNA 、RNA 等核酸分子，对基因表达发挥不同调节作用 （激活或抑制：）的各类蛋内质因子的总称，也称反式作用元件。
7． SD 序列（Shine Dalgamo sequence）
【答案】SD 序列是指存在于原核生物mRNA 起始密码子上游7〜12个核苷酸的富含嘌呤的保守片段，能与 16SrRNA3' 端富含嘧啶的区域进行反向互补，所以可将mRNA 的AUG 起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。
8． 等电聚焦
【答案】
等电聚焦是指利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同，在一个
稳定的、连续的、线性pH 梯度中进行蛋白质的分离和分析的技术。
二、简答题
9． 请列举3项实验证据来说明为什么染色质中DNA 与蛋白质分子是相互作用的。
【答案】证据一:染色质DNA 的Tm 值（DNA 解链温度）比自由DNA 高，说明染色质中DNA 极可能与蛋白质分子有相互作用。
证据二:DNA 酶I （DNaseI ）对染色质DNA 的消化速度远远慢于对纯DNA 的作用。
证据三:在染色质状态下，由DNA 聚合酶和RNA 聚合酶催化的DNA 复制和转录活性大大低于在自由DNA 中的反应。
（证据四:用小球菌核酸酶处理染色质以后进行电泳，可以得到均为200bp 基本单位倍数的DNA 片段）
10．简述蛋白质生物合成的过程。
【答案】蛋白质生物合成包括5步：
（1）氨基酸的活化：在氨酰合成酶的作用下，将氨基酸活化形成氨酰;
（2）起始：原核生物需要三个起始因子（IF ）、真核生物需要更多起始因子（elF ）的参与，与mRNA 、核糖体大小亚基结合形成起始复合物；
（3）延伸：在延伸因子的作用下催化进位、转肽与移位反应；
（4）终止:需要释放因子（RF ）参与，切开肽酰-tRNA 中连接tRNA 和肽链羧基端（C 端）氨基酸的酯键, 以及核糖体与mRNA 的解离；
（5）翻译后的折叠与加工：在分子伴侣的作用下完成新生肽的折叠与寡聚蛋白的组装；氨末端、羧末端的修饰；信号肽的切除；二硫键的形成；酶原的激活等。
11．蛋白质有哪些翻译后的加工修饰？其作用机制和生物学功能是什么？
【答案】蛋白加工修饰：
（1）N 端fMet 或Met 的切除
原核生物的肽链，其N-端不保留fMet ，其甲酰基被脱甲酰化酶水解，原核及真核细胞中端的Met 往往在多 肽链合成完毕之前就由氨肽酶水解而除去。新生蛋白质在去掉N 端一部分残基后就变成有功能的蛋白质。
（2）二硫键的形成
蛋白质中的二硫键由两个半胱氨酸残基通过氧化作用而形成。二硫键的正确形成对维持蛋白质的天然构象起重要作用。
（3）特定氨基酸的修饰
生物体内最普通发生的氨基酸侧链的修饰作用主要包括磷酸化、糖基化、甲基化、乙酰化等。
①磷酸化
主要是由多种蛋白激酶催化，发生在Ser 、Thr 和Tyr 等3种氨基酸的侧链；
②糖基化
是由内质网中的糖基化酶催化进行的；
③甲基化
主要是由细胞质基质内的N-甲基转移酶催化完成，多发生在Arg 、His 和Gin 的侧链基团的N-甲基化以及 Glu 和Asp 侧链基团的0-甲基化；
④乙酰化
是由N-乙酰转移酶催化多肽链的N 端，发生在Lys 侧链上的
化学修饰后才能成为成熟的蛋白质而参与正常的生理活动。
⑤泛素化
首先在A TP 提供能量的情况下，泛素激活酶E1黏附在泛素分子尾部的Cys 残基上激活泛素，E1酶再将激活的泛素分子转移到泛素结合酶E2上，再由E2酶和一些种类不同的泛素连接酶E3酶共同识别靶蛋白，对其进行泛素化修饰。蛋白质泛素化以后，被标记的蛋白质常被运送到相对分子质量高的蛋白降解体系中直到该蛋白完全被降解。
（4）新生肽中非功能片断的切除
不少多肽类激素和酶的前体需要经过加工切除不必要的肽段才能成为有活性的分子。例如，胰岛素的成熟。
12．简述酵母单、双杂交系统的基本原理与应用。
【答案】（1）酵母单杂交系统。
①基本原理
将已知的特定顺式作用元件构建到最基本启动子（Pmin ）的上游，把报告基因连接到Pmin 下游。然后将编 码待测转录因子的cDNA 与已知酵母转录激活结构域（AD ）融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能够 与顺式作用元件相结合，就能激活Pmin 启动子，使报告基因得到表达。
②应用
a. 用于检测已知DNΑ-蛋白质之间是否存在相互作用；
b. 用于分离结合于目的顺式调控元件或其他短DNA 结合位点蛋白的新基因；
c. 用于定位已经证实的具有相互作用的DNA 结合蛋白的DNA 结合结构域进一步准确定位与DNA 结合的核苷酸序列。
（2）酵母双杂交系统。
①基本原理
把编码已知蛋白的DNA 序列连接到带有酵母转录调控因子DNA 结合结构域编码区（BD ）的表达载体上。导入酵母细胞中使之表达带有DNA 结合结构域的杂合蛋白，与报告基因上游的启动调控区相结合，准备作为“诱 饵”捕获与已知蛋白相互作用的基因产物。此时，若将已知的编码转录激活结构域（AD ）的DNA 分别与待筛 选的cDNA 文库中不同插入片段相连接，获得
。蛋白质前体经过特定的