题目：扁杏仁肽的制备分离及其血管紧张素转化酶抑制活性、细胞活性分析

摘  要

扁杏仁是蔷薇科（Rosaceae）杏属（Armeniaca.）植物杏（Armeniaca vulgaris Lam.）的干燥种子。它含有丰富的蛋白、脂肪、多糖、甙类、微量元素及维生素等，是普遍的食品原料和多种天然化合物来源，因此成为一个研究热点。随着近年来对杏仁的深入研究，人们发现杏仁蛋白酶解所得的多肽，具有抗氧化、抗癌、抗高血压、抗炎症、镇痛等不同的生理活性。本文对扁杏仁多肽的制备分离及其抗高血压活性进行了系统研究，以期为杏仁的深加工和降压肽的开发提供理论依据。

首先高效提取杏仁中的总蛋白并进行水解，然后通过葡聚糖凝胶层析与反相制备色谱联合的分离手段，大量制备了7种分子量<1500的多肽，用HPLC法研究了其对血管紧张素转化酶（ACE）的抑制作用。结果表明7种多肽均具有程度不等的抑制活性，进一步测定获得了两种活性最强的杏仁肽，“肽A”和“肽B”，的氨基酸序列：

肽A ：Met-His-Thr-Asp-Asp (ACE抑制性的IC50=67.52±0.05微克)

肽B： Gln-His-Thr-Asp-Asp (ACE抑制性的IC50=43.18±0.07微克)

为了进一步确证“肽A”和“肽B”的降压作用，又继续进行了这两种活性肽对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）功能的影响研究。从而从对ACE的抑制活性和对HUVEC的作用两个方面，证明“肽A”和“肽B”可能具有良好的降压作用。

总而言之，本研究系统研究了扁杏仁肽的制备、分离和降压作用，得到了具有ACE抑制性和促进HUVEC释放降压因子的两个产物肽A和肽B，并测定了其氨基酸序列，推测了该结构类似物具有相近的性质，为天然高蛋白植物酶解与分离研究提供了完整的处理步骤，也为后续ACE抑制性多肽研究提供了基础，并提出了这两种产物参与生物实验的可能性。

本论文包括4部分。

1.绪论

简要介绍杏仁的研究现状，杏仁蛋白的提取、分离方法，介绍生物活性肽的概念及其与高血压的关系，以及本研究中使用的各种概念、技术方法和原理

2.杏仁多肽分离

通过前期研究确定了杏仁酶解的过程。详细介绍了葡聚糖凝胶层析与反相制备色谱技术，通过实验确定了色谱条件。此步骤获得7个分子量<1500的杏仁多肽。

3．杏仁多肽的ACE抑制活性筛选与测序

使用HPLC，在体外环境检测不同多肽对ACE-HHL体系的影响。以生成的马尿酸（HA）峰面积表示对ACE的抑制率。通过计算绘制曲线，筛选出2种具有较高ACE抑制活性的成分肽A和肽B。然后使用蛋白自动测序仪，对二者进行氨基酸测序。

4． 两种生物活性肽对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的作用

将两种活性肽与去甲肾上腺素（NE）和卡托普利（Cap）对比，加入对数生长期的HUVEC种，进行了三组实验

MMT比色实验证明两种活性肽对HUVEC无毒性；NO浓度实验证明两肽促进NO释放；内皮素（ET）浓度实验证明两肽对ET释放有抑制作用；以上三个实验共同证明两肽对HUVEC无毒性且促进降血压，并对NE的生理活性有调整作用。

论文最后对本研究进行了总结。

 

关键词：杏仁蛋白，生物活性肽，氨基酸序列，ACE抑制性，人脐静脉内皮细胞

论文最后对本研究进行了总结。