题目：花生致敏蛋白的纯化及降敏研究

花生过敏的长期性和致命性严重影响了人们的生活，而我国是花生生产和消费的大国，花生的广泛使用很难避免对花生的食用。在花生过敏中，蛋白成分通常是引起过敏反应的因素，因此高纯度蛋白的提取及其降敏研究是非常重要的。
本试验基于蛋白的溶解性、分子量大小、电荷等特性，通过离心、沉淀、凝胶过滤色谱法等纯化得到活性蛋白。并以提取的花生致敏蛋白及Arah 1为研究对象，研究辐照、酶解对花生致敏蛋白生化性质的影响，为研制和开发适合过敏患者使用的低敏或脱敏食品提供理论和技术支撑，具有重要的理论价值和现实的应用前景。并对采自不同产区的花生品种进行免疫原性分析，获取低致敏性或某种致敏蛋白缺失的花生品种，为低敏性食品的研制提供物质基础。
主要研究成果如下：
1.??????? 根据蛋白溶解特性分离得到盐溶性花生致敏蛋白和醇溶性花生致敏蛋白，进一步对两种溶解性的蛋白进行硫酸铵分级沉淀、等电点分级沉淀及葡聚糖凝胶层析，分离纯化出花生中三种主要致敏蛋白Arah 1、Arah 2、Arah 3。
2.??????? 分别用纯化的盐溶性花生致敏蛋白、醇溶性花生致敏蛋白及Arah 1为抗原，免疫大白兔，最佳包被浓度均为1×10-4mg/ml，此时，抗体效价均高达100000。
3.??????? 采用未脱脂花生粉、完整的花生颗粒、盐溶性花生致敏蛋白粉、醇溶性花生致敏蛋白粉及Arah 1在水溶液和粉末两种状态下经不同剂量辐照后的分子量分析及抗原性分析发现：处于粉末状态的蛋白其分子量没有发生明显的变化，而在溶液状态下蛋白分子量发生明显变化（整粒花生除外）。但辐照后蛋白与抗体的结合力在不同存在状态下表现不同。
4.??????? 选用不同来源的蛋白酶筛选降低花生致敏性的最佳用酶，本试验结果表明，不同酶降解过程不同，酶解效果也不一。在最佳pH、最适温度下，Alcalase、Neutrase、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶的最佳酶用量分别为43.04U、396.8U、57.44U、4.72U、129.6U，底物浓度分别为1%、0.25%、1%、0.5%、0.25%以及酶解时间分别为4h、4h、4h、8h、4h。结合抑制率试验确定最佳用酶为胃蛋白酶和Alcalase，木瓜蛋白酶酶解效果比较好，Neutrase、风味蛋白酶的酶解效果较差。在最适条件下对花生颗粒进行酶解发现蛋白降解明显，这为加工中整粒花生的降敏研究提供了可能。
5.??????? 花生中主要有10种不同分子量的蛋白，分别为61kD、44kD、41kD、37kD、23kD、19kD、17kD、14kD、11kD、8kD的蛋白。不同产区的花生其蛋白分子量差异不大：除61kD（Arah 1）在22号产区中的蛋白含量较低；37kD（Arah 3）蛋白在2、16、23、24、25、26号产区中发生蛋白缺失，在20号产区中蛋白含量极低。Ci-ELISA分析后：33、34号花生抑制率近100%，与抗体有很强的结合能力；13、25、29、31、32号花生的抑制率近20%，其蛋白与抗体可以结合，并有弱得结合力；其余大部分花生其抑制率为负值，蛋白与抗体结合力小或者没有结合力，说明花生品种间蛋白结构存在一定的差异，