题目：鳜鱼外周血细胞和血清免疫球蛋白的初步研究

　　免疫学是生命科学中近年来发展极为迅速的一门前沿学科，其理论和技术在深度和广度上都有了长足的进展。鱼类免疫学是在医学免疫学和其它相关学科发展的过程中逐渐派生出来的。每当医学免疫学研究取得突破性的进展，其成就和技术则被借鉴与鱼类免疫学的研究中。除此之外，近二十年来水产业在全世界范围内得到迅速发展，这更刺激了鱼类免疫学的发展。发达国家在鱼类免疫学的基础研究（如免疫系统各组成部分的结构和功能，免疫反应的机理等）和应用基础研究（如基因工程疫苗研制）等方面均取得了显著的进展。而我国在这方面的研究起步较晚，基础研究非常薄弱。这一现状与我国水产养殖业发展的要求极不适应。因此，在我国大力开展鱼类免疫学方面的研究工作是非常迫切和有意义的。这不仅可以促进鱼类免疫学基础研究的发展，亦可为我国水产养殖业的健康发展提供理论依据。 鳜鱼[Siniperca chuatsi (Basillewsky)]现已成为我国重要的淡水养殖名优品种。但是有关归于免疫系统的研究报道至今未见；而且在高密度的养殖条件下，鳜鱼流行病是有发生。因此，本研究以鳜鱼为实验材料，就其免疫生物学进行了初步研究。在细胞和亚细胞水平上，对鳜鱼外周血细胞，特别是具有免疫活性的白细胞的形态结构进行了观察和分类鉴定，并对其部分生理指标进行了测定；在分子水平上，对鳜鱼血清免疫球蛋白进行了分离和纯化，并测定了其亚单位的分子量。本研究的开展，旨在深入了解归于免疫系统的组成和功能，丰富鱼类免疫学基础理论知识。这在鳜鱼以至其它鱼类的防病养殖之中，对于其疾病的诊断和免疫接种具有重要的理论和实际意义。 本研究采用常规方法对鳜鱼外周血细胞的显微和亚显微结构进行了观察。光镜下，血涂片经过染色，可见鉴别出红细胞、血栓细胞、淋巴细胞、单核细胞核嗜中性粒细胞，未发现嗜酸性和嗜碱性粒细胞。此外，还见到幼稚的和正在分裂的红细胞，提示红细胞亦可在外周血液中通过直接分裂而产生。白细胞中，血栓细胞体积小（平均6.22﹡4.62?m），嗜中性粒细胞体积最大（平均11.83*10.77?m）；血栓细胞和淋巴细胞数目较多（分别占白细胞总数的72.1%和20.2%），嗜中性粒细胞和单核细胞较少（分别占5.4%和2.3%）。电镜下，红细胞中可见线粒体和高尔基复合体等细胞器；淋巴细胞线粒体中可见类似髓样体的板层状结构；血栓细胞和单核细胞的结构与其它鱼类相应细胞的基本一致；至于粒细胞，则根据胞质内颗粒及其它细胞器的结构，将其分为Ⅰ型和Ⅱ型粒细胞，后者类似于其它鱼类的嗜中性粒细胞，前者属于那种类型尚待进一步研究。此外，鳜鱼血液中还可观察到发育不充分的巨噬细胞和类似浆细胞的细胞。后者胞质中有成层的粗面内质网饶核分布，但特征并没有哺乳动物浆细胞的典型。 本研究还采用免疫亲和层析技术从受免鳜鱼血清中选择性的分离抗原特异性抗体（免疫球蛋白）。将鳜鱼（抗山羊IgG）的免疫血清通过以山羊IgG－琼脂糖为固相载体的层析柱，样品中对配体有亲和力的免疫球蛋白吸附到固相载体上，而其他杂质则在起始缓冲液充分洗涤的过程中，穿过基质流出层析柱从而形成第一个层析峰。然后用碱性洗脱液将免疫球蛋白洗脱下来并形成第二个层析峰。收集此部分并用中和液平衡，在磷酸缓冲液中充分透析脱盐。纯化的鳜鱼血清免疫球蛋白在还原条件下通过SDS－PAGE，电泳图谱上仅见分子量约为72kD和29kD的两条蛋白带，分别代表免疫球蛋白的H链和L链，表明样品的纯度较高。如果鳜鱼血清免疫球蛋白也像大多数其它硬骨鱼类IgM那样在自然状态下为四聚体，那么其分子量理论值应为808kD。但是，尚需进一步的研究以证实鳜鱼血清免疫球蛋白亦为四聚体的IgM。由此可见，本实验所采用的特异性配体亲和层析方法用于分离纯化鱼类免疫球蛋白是行之有效的。他克服了传统方法（如饱和硫酸铵沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等）操作步骤较为繁琐，制备物的纯度较低等缺点。通过本法获取的高纯度免疫球蛋白可用于结构分析或制备高特异性的抗体。 此外，本文在文献综述部分还对鱼类免疫系统研究的现状和进展进行了概述，旨在反映该领域发展的最新成就和存在的主要问题。