2018年第三军医大学耳鼻咽喉科学617西医综合之生物化学考研基础五套测试题
● 摘要
一、名词解释
1． 岗崎片段（Okazaki fragment）。
【答案】岗崎片段是指DNA 的随后链的合成方向与复制叉的前进方向相反，只能断续地合成的多个短片段。它们随后连接成大片段。
2． 核苷。
【答案】核苷是指各种碱基与戊糖通过C-N 糖苷键连接而成的化合物。
3． 核酶。
【答案】核酶是指一些具有催化功能，可以催化自我拼接等反应，具有催化作用的RNA 。
4． 核酸的变性与复性。
【答案】核酸的变性是指核酸双螺旋的氢键断裂，变成单链，并不涉及共价键的断裂的过程。
核酸的复性是指变性DNA 在适当条件下，可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构的过程。
5． 亲和层析。
【答案】亲和层析是指利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别和结合能力建立起来的分离纯化技术。把待纯化蛋白质的特异配体共价连接到载体上，将此载体装入层析柱，对蛋白质混合物进行柱层析时，待纯化的蛋白质与 配体特异结合，吸附在层析柱上，而其他的蛋白质不能被吸附，通过洗脱可以除去，最后用含游离配体的溶液或 用改变了 pH 或离子强度的溶液将与配体结合的蛋白质洗脱下来
6． 核苷酸的补救合成途径。
【答案】核苷酸的补救合成途径是指利用核酸降解或进食等从外界补充的含N 碱基或核苷合成新的核苷酸的途径。
7． SD 序列（Shine-Dalgamo sequence）。
【答案】SD 序列是指位于原核生物mRNA5' 端的一段富含嘌呤的保守序列，由
成，一般位于起始
密码子上游约7个碱基的位置。
第 2 页，共 32 页 个碱基组
8． 表达载体（expression vector）。
【答案】表达载体是指为使插入的外源DNA 序列可转录，进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体。
二、问答题
9． DNA 分子二级结构有哪些特点？
【答案】按Watson-Crick 模型，DNA 的结构特点有：两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴互绕；碱基位于结构的内侧，而亲水的糖磷酸主链位于螺旋的外侧，通过磷酸二酯键相连，形成核酸的骨架；碱基平面与轴垂直，糖环平面则与轴平行；两条链皆为右手螺旋；双螺旋的直径为2mn ，
碱基堆积距离为
两核酸之间的夹角是每对螺旋由10对碱基组成；碱基按A=T, G=C配对互补，彼此以氢键相连；维持DNA 结构稳定的力主要是碱基堆集力；双螺旋结构表面有两条螺形凹沟，一大一小。
10．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？
如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？
你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的
种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条
小的条带。这一次染色方法是什么？为什么
会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？
【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。
（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。
（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。
为了将
的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，
可使用凝胶过滤层析。
第 3 页，共 32 页 大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这的
核糖核酸酶应该先流出来。
11．尽管不同生物DNA
的
应大的变化。这种现象如何解释？ 比例变化很大，但是各种生物的氨基酸比例却没有相
【答案】由于一个氨基酸通常有多个密码子（简并性），可变的碱基出现在密码子的第三位。摆动位置上核苷酸 的变化改变了比例，但并不一定改变密码子所代表的氨基
酸。所以的比例变化和蛋白质氨基酸比例的变化不存在对应关系。
12．怎样确定双向复制是DNA 复制的主要方式，以及某些生物的DNA 采取单向复制？
【答案】通过放射自显影方法，在复制开始时，
先用低放射性的
菌。经数分钟后，
再转移到含有高放射性的
制起始区的放射性
标记密度比较低，感光还原的银颗粒密度就较低；继续合成区标记密度较高，银颗粒密度也较高。对于枯草杆菌、某些噬菌体和高等真核细胞的染色体等许多DNA 来说，都是双向复制，所以银颗粒的密度分布应该是中间密度低，两端密度高；
而对于大肠杆菌噬菌体质体和真核细胞线粒体等某些DNA 来说，复制是单向的，则银颗粒的密度分布应该是一端高、一端低。
13．有人认为严格地说维生素D 不是一种维生素，你认为有道理吗？
【答案】有一定道理，因为维生素一般是指生物体内不能合成但是生物体正常生长所必需的一类微量有机物质，而人体及动物体内皮肤中含有7-脱氢胆固醇，可以在紫外线照射下转化为维生素D , 所以有人认为严格地说，维生素D 不是一种维生素。
14．胰岛素分子中包含A 链和B 链，是否代表有两个亚基? 为什么？
【答案】胰岛素分中的A 链和B 链并不代表两个亚基。因为亚基最重要的特征是其本身具有特定的空间构象，而胰岛素的单独的A 链或B 链都不具有特定的空间构象，所以说胰岛素分中的A 链和B 链并不代表两个亚基。
15．免疫球蛋白基因重组过程中产生的P 核苷酸和N 核苷酸是如何来的？它们产生的意义和需要付出的代价是什么？
【答案】免疫球蛋白基因在重组过程中，
条链，
形成末端。
游离复合物切开其核苷酸与基因接头处的一攻击另一条链的酯键，在基因片段末端形成发夹结构。的培养基中继续标记。这样在放射自显影图上，复标记大肠杆然后复合物进一步将发夹结构切开，单链切开的位置往往不是原来通过转酯反应连接的位置，多出的核苷酸与末端序列相同，但方向相反，称为P 核苷酸。末端可以被外切酶切除一些核苷酸，也可以由脱氧核苷酸转移酶外加一些核苷酸，称为N 核苷酸。
在接头处随机插入或删除核苷酸可以增加抗体基因的多样性，但如果插入或删除核苷酸数不是3的倍数，就 将改变阅读框架而使基因失活。
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