● 摘要
化学发光作为一种检测手段，其所需仪器设备简单易得、操作方便、灵敏度高，故而在其问世后的短短时间里得到了迅猛的发展。八十年代后，分析工作者们又将新出现的流动注射技术与化学发光检测相结合，更进一步地推动了化学发光的发展，使其深入到了临床、环境监测、食品分析、化学工程等各个领域，由于使用流动注射技术无需在反应达到平衡状态之后再进行测定，故而成倍地提高了以往的分析速度和灵敏度。 化学发光体西的研究一直是分析工作者们关注的中心，以往常用体系为Luminol-氧化剂-催化剂或协同剂，本文提出了一个新的化学发光体系：Luminol-K_7Cu(IO6)_2-KOH，利用一些具有多羟基结构的还原性有机物在低浓度时可对Cu(III)-Luminol 的化学发光产生正协同增强作用且浓度与增强作用的大小在一定范围内呈现性关系来进行这类化合物的直接测定。另外，本文采用反相流动注射技术，以样品和K_7Cu(IO6)_2的混合溶液作为载流，注入Luminol溶液，这样做不仅可以是基线稳定、重现性好，同时又节约了试剂、提高了测定的灵敏度。 本文考察了一系列多羟基化合物对此体系的增强作用，发现二羟基苯酚、三羟基苯酚、葡萄糖、链霉素、Vc 、Vb 、药根碱等物质在一定范围内对此体系有不同的增强作用，我们着重研究了对葡萄糖、链霉素、焦性儿茶酚、尿素这四种物质的测定。在实验过程中，分别考察了KOH，Luminol，K_7Cu(IO6)_2 的浓度影响以选择适宜的工作浓度；K_7Cu(IO6)_2在工作浓度时稳定性、干扰情况、线性范围。结果知上述四种物质的线性范围依次为4-800×10ˉ（-7）g/mL；3－70×10ˉ（-7）g/mL；6－600×10ˉ（-8）g/mL；2－1000×10ˉ（-8）g/mL，检出限依次为：1.8×10ˉ（-7）g/mL；1.3×10ˉ（-7）g/mL；2.3×10ˉ（-8）g/mL ；7.2×10ˉ（-9）g/mL 。我们以葡萄糖针剂和人尿作为样品进行了样品分析，结果比较满意。 在实验中，我们发现大部分多羟基化合物在低浓度范围内能增强此体系的化学发光，但浓度增达到一定程度以后，反而会产生抑制作用。此增强与抑制机理有待进一步的探讨。 另外，本文以附着有甲壳质的硅胶作载体分别固定辣根过氧化物酶(HRP)和D-氨基酸氧化酶，把D-氨基酸氧化酶催化D-氨基酸生成H2O2的反应和HRP催化Luminol-H2O2产生化学发光的反应相耦合，结合停流技术进行了D-氨基酸的测定。实验表明，以本文所用载体固定酶后酶可保持较高的活性，酶柱的使用寿命与贮存寿命都比较长。我们在选定的工作条件下：以Tris-HCL 做缓冲液，酸度为PH=9.0；二泵速均为1.5mL/min，停流时间为2min；Luminol浓度为2×10ˉ（-8）mol/L；温度为20℃；发现D-氨基酸在0.8－14×10ˉ（-7）g/mL浓度范围内与化学发光信号的变化成线性关系，检出限为1.8×10ˉ（-8）g/mL，RSD=0.86% 。