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一、名词解释

1． 中心法则。

【答案】中心法则是描述从一个基因到相应蛋白质的信息流的途径。遗传信息Pfc 存在DNA 中，DNA 通过复制传给子代细胞，信息被拷贝或由DNA 转录成RNA , 然后RNA 翻译成多肽。另外，逆转录酶也可以以RNA 为模 板合成DNA 。

2． RNA interference （RNA 干扰）。

【答案】RNAinterferenceCRNA 干扰）即RNAi ，是指与靶基因同源的双链RNA 诱导的特异性转录后基因表达 沉默的现象，其作用机制是双链RNA 降解产生的小干扰RNA （siRNA ）与同源的靶mRNA 互补结合，导致mRNA 降解而抑制基因表达。RNAi 技术广泛用于基因功能研宄和重大疾病的基因治疗。

3． 必需氨基酸（essential amino acid）。

【答案】必需氨基酸是人体必需的，但自身无法合成只能依靠食物提供的氨基酸。人类的必需氨基酸有八种：Leu , lie , Val , Met , Ser , Thr , Trp , Phe , Lys 。

4． 分子杂交（hybridization ）。

【答案】杂交分子是指当两条不同来源的DNA （或RNA ）链或DNA 链与RNA 链之间存在互补顺序时，在一定条件下可以发生互补配对形成的双螺旋分子，形成杂交分子的过程称为分子杂交。

5． SAM 。

【答案】SAM 即S_腺苷甲硫氨酸，是重要的活化甲基供体。

6． 半必需氨基酸。

【答案】半必须氨基酸是一类人体可以合成，可维持成人蛋白质合成的需要，但对正在成长的儿童来说，生长旺盛，蛋白质合成旺盛，对氨基酸的需要量大，自身合成的氨基酸不能满足需要，必须从食物中摄取作为补充的氨基酸，如组氨酸。

7． 易化扩散

【答案】易化扩散又称促进扩散，是指物质从高浓度到低浓度由载体蛋白（即转运蛋白）介

导的跨膜扩散，是自然发生的，不需要加入能量，是一种被动转运。

8． 诱导酶。

【答案】诱导酶是指当生物体或细胞中加入特定诱导物后诱导产生的酶，它的含量在诱导物存在下显著提高，诱导物通过对基因表达的调控促进酶蛋白的合成。

二、问答题

9． 简述柠檬酸循环的要点。

【答案】（1）柠檬酸循环中有4次脱氢、2次脱羧及1次底物水平磷酸化；

（2）柠檬酸循环中有3个不可逆反应、3个关键酶（异柠檬酸脱氢酶、a-酮戊二酸脱氢酶系、柠檬酸合酶）；

（3）柠檬酸循环的中间产物包括革酰乙酸在内起着催化剂的作用，草酰乙酸的回补反应是丙酮酸的直接羧化或者经苹果酸生成。

10．某些植物的次生代谢物羟基柠檬酸被用作减肥药物。

（1）这种化合物能够抑制柠檬酸裂合酶的活性，你认为抑制属于哪一种形式？

（2）为什么柠檬酸裂合酶活性的抑制能够阻止糖转变成脂肪？

（3）你认为还有哪些化合物的合成受到轻基柠檬酸的抑制？为什么？

【答案】（1）轻基柠檬酸的结构与柠檬酸相似，所以应该是一种竞争性抑制剂。

（2）糖转变成脂肪，

需要丙酮酸变成乙酰

发生在细胞液。故乙酰

催化下，重新变成乙酰这一步发生在线粒体基质，但脂肪酸的合成进入细胞液，需要通过柠檬酸离开线粒体进入细胞液，然后，再在柠檬酸裂合酶的因此，抑制了柠檬酸裂合酶的活性就等于阻止了乙酰

从而就抑制了糖转变成脂肪。

（3）胆固醇以及与胆固醇相关的化合物的合成也受到羟基柠檬酸的抑制，因为它们合成的前 体也是乙酰

11．为什么在聚合酶链反应中控温非常重要？

【答案】聚合酶链反应依靠DNA 链的反复循环分离再与引物结合。第一步需要的温度比第二步高，因此需要严格控制反应温度。

12．血红蛋白氧饱和度与氧分压关系曲线的特征如何? 有何生理意义？

【答案】协同效应、波尔效应和别构效应三者使血红蛋白的氧合曲线呈S 形。在肺部，

较高，血红蛋白被饱和，在组织中，

比降低，S 形的氧合曲线加大血红蛋白的卸氧量，使血红蛋

白的输氧能力达到最高效率，能够更好完成运输氧的功能。

13．在一个实验系统中，你将一克隆的基因、RNA 聚合酶、转录因子X 和四种核苷三磷酸混合在一起，结果你检测到了转录。然而你如果在系统中同时加入组蛋白，则没有转录发生。但是如果你先让转录因子与DNA 保 温一段时间后在加入组蛋白和RNA 聚合酶, 则仍然能观测到转录的进行。试问你从以上实验中能得到什么结论？

【答案】这意味着：转录因子与DNA 模板特别是启动子序列的正常结合是启动基因转录所必需的。组蛋白与 DNA 模板的结合可阻止转录因子与DNA 的结合，从而抑制基因的转录。但是如果你先让转录因子与DNA 保温一段时间后加入组蛋白和RNA 聚合酶，则转录因子已结合上去，所以仍然能观测到转录的进行。

14．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？

如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？

你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的

种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条

小的条带。这一次染色方法是什么？为什么

会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？

【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。

（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。

（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。

为了将的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，可使用凝胶过滤层析。的核糖核酸酶应该先流出来。

大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这