● 摘要
恶性肿瘤是人类健康的一大杀手，发病率逐年上升，其中胃癌死亡率居我国恶性肿瘤之首，化疗是其治疗的主要手段，然而目前化疗失败的主要原因之一是肿瘤多药耐药性（multidrug resisitance，MDR）的发生。因此，寻找低毒、高效的肿瘤MDR逆转剂已成为当今研究的热点。野菊花（Chrysanthemum indium L.）是药食同源植物，具有来源广泛，毒性小等特点。本实验室前期筛选肿瘤MDR逆转剂时，发现野菊花能增加肿瘤细胞内Rho123的蓄积；研究发现芹菜素和木犀草素能增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性；而野菊花提取物（Chrysanthemum indium extract，CIE）中芹菜素和木犀草素含量较高；所以，本实验以野菊花作为研究对象，研究CIE和野菊花乙酸乙酯部位（Ethyl acetate part of Chrysanthemum indium，EACI）对胃癌细胞株SGC7901/ADR多药耐药性的逆转功效，并探讨其可能的作用机制，为野菊花的临床应用提供理论依据。
研究方法和结果：
(1)CIE和EACI的制备。
(2)本研究利用MTT法检测了CIE和EACI对人胃癌耐ADR细胞株SGC7901/ADR的细胞毒作用。结果显示：CIE的IC50和IC20分别为1.36mg/mL 和1.0 mg/mL；EACI的IC50和IC20分别为990.07mg/mL和57.31mg/mL。
(3)利用MTT法检测了CIE和EACI对人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR的逆转作用。结果显示：用终浓度为0.8mg/mL和1.0mg/mL的CIE分别处理SGC7901/ADR细胞后，计算得他们的逆转倍数分别为1.93和2.54；用终浓度为25mg/mL和50mg/mL的EACI分别处理SGC7901/ADR细胞后，计算他们的逆转倍数分别为1.82和6.05。实验结果表明CIE和EACI均能逆转肿瘤细胞SGC7901/ADR的多药耐药性。
(4)利用流式细胞术分别检测了CIE和EACI对SGC7901/ADR细胞ADR蓄积的影响。结果显示：用终浓度为0.8mg/mL和1.0mg/mL的CIE分别处理SGC7901/ADR细胞后，与阴性对照组相比，细胞内ADR的平均荧光强度均增强，波峰右移，且蓄积倍数分别为1.59和1.77；用终浓度为25mg/mL和50mg/mL 的EACI分别处理SGC7901/ADR细胞后，SGC7901/ADR细胞内ADR的平均荧光强度均明显增强，波峰明显右移，细胞内ADR的蓄积倍数分别为1.70和2.17。结果表明CIE和EACI均能增加肿瘤细胞SGC7901/ADR对ADR的蓄积。
(5)利用半定量RT-PCR技术分别检测了CIE和EACI对SGC7901/ADR细胞内MDR1基因转录水平的影响。结果显示：用终浓度为0.8mg/mL和1.0mg/mL的CIE分别处理SGC7901/ADR细胞后，与阴性对照组相比，细胞内MDR1基因的转录被降低，且分别降低了28.57%和32.14%；用终浓度为25mg/mL和50mg/mL的EACI分别处理SGC7901/ADR细胞后，与阴性对照比，细胞内MDR1基因的转录分别被降低了59.26%和73.33%。结果表明CIE和EACI均能降低耐药细胞SGC7901/ADR内MDR1基因的转录水平。
(6)利用免疫荧光法分别检测了CIE和EACI对SGC7901/ADR细胞P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）表达的影响。结果显示：用终浓度为0.8mg/mL和1.0mg/mL的CIE分别处理SGC7901/ADR细胞后，与阴性对照组相比，细胞的平均荧光强度减弱，波峰左移，P-gp的表达分别被降低了13.93%和27.06%；用终浓度为25mg/mL和50mg/mL的EACI分别处理SGC7901/ADR细胞后，与阴性对照组相比，细胞内平均荧光强度明显减弱，波峰左移，P-gp的表达分别被降低了21.40%和34.15%。
(7)利用Western blot法分别检测了CIE和EACI对SGC7901/ADR细胞胞浆内IKBα和p-IKBα的影响。结果显示：用CIE和EACI处理SGC7901/ADR细胞后，与对照组相比，细胞胞浆内IKBα均增多，而p-IKBα均减少。
(8)利用Western blot法分别检测了CIE和EACI对SGC7901/ADR细胞NF-κB核转位的影响。结果显示：用CIE和EACI处理SGC7901/ADR细胞后，与对照组相比，细胞内NF-κB的核转位均被减少。结果表明CIE和EACI均能降低SGC7901/ADR细胞内NF-κB的核转位。
结论：CIE和EACI均具有逆转肿瘤多药耐药性的作用。其逆转机制与降低NF-κB的核转位，抑制了细胞内MDR1基因的转录水平，进而降低了P-gp的表达有关。