● 摘要
大量研究表明蚯蚓体内含有CAT、SOD、POD、GR、GSH-PX、GST等抗氧化酶。抗氧化酶是一类具有重要生理功能的酶，它们能及时清除剩余的氧自由基，使体内氧自由基浓度维持在一个有利无害的生理水平，从而防止机体受到过氧化物的伤害，因此，从蚯蚓体内分离纯化出此类抗氧化酶对于拓宽抗氧化酶的来源及蚯蚓的综合利用都具有重要的意义。目前，酶的分离纯化主要包括酶的提取、初分离、纯化等步骤，涉及的主要技术有抽提、沉淀、离心、盐析、超滤、离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤、电泳等。本研究采用闪式提取技术，固液比为1:4（m/V）的2.5mmol/L pH7.0磷酸缓冲液，提取电压110V，提取时间2min，从蚯蚓体内提取出SOD、CAT，并通过羧甲基纤维素CM-22离子交换层析实现SOD和CAT的联合提取分离，SOD、CAT的活性回收率分别达到88.23%和 69.5%。在纯化工艺中经过丙酮沉淀和柱层析技术得到蚯蚓SOD纯品，比活达到9352U/mg，回收率18.44%，纯化倍数474倍，产物在SDS-PAGE上为单一条带，其亚基分子量约为17kD。纯化后的蚯蚓SOD在35℃~55℃之间具有良好的热稳定性，最适温度为45℃，pH值耐受范围4~11。通过柱层析纯化了蚯蚓CAT，比活达到22606U/mg，回收率14.98%，纯化后的蚯蚓CAT在25℃~45℃之间具有稳定性，最适温度为35℃，最适pH值为6，在pH值4~10之间具有较好的稳定性。