题目：果汁中酸土环脂芽孢杆菌单克隆抗体的制备

 酸土环脂芽孢杆菌(Alicyclobacillus  acidoterrestris)，简称耐热菌，也称之为嗜酸耐热菌，（Thermophilic  acidophilic  bacteria，TAB）是引起浓缩苹果汁变质的主要微生物，由于其耐热耐酸特性，能够经受酸性果汁加工中的巴氏杀菌以芽孢形式而存活，一旦有合适的条件，就可在果汁中迅速生长繁殖从而导致果汁败坏。因此，耐热菌是浓缩苹果汁生产中重要的目的控制微生物。也是引起浓缩苹果汁变质的重要微生物之一。 
   目前，对耐热菌的检测，多采用传统平板培养 KFL 计数法。这种方法耗费时间长，一般需要 5-7 天才可以得出检测报告。检测结果不能满足生产需要，不能及时检测出果汁中是否含有耐热菌以预告工业生产采取防范控制措施。本实验室首次创立了快速检测耐热菌的双夹心 ELISA 方法，但多克隆抗体制备步骤繁琐，同时抗体效价有待进一步提高。本研究通过制备抗酸土环脂芽孢杆菌鼠源单克隆抗
体，为本实验室创立的耐热菌 ELISA 技术提供更好的条件支持。 
主要研究结果如下： 
    （1）本试验首先以酸土环脂芽孢杆菌菌悬液作为免疫原免疫 8 周龄雌性 Balb/c小鼠，经 4 次免疫，抗体效价达到 1:25600。 
    （2）使用聚乙二醇 PEG 细胞融合技术，将免疫脾淋巴细胞和 SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合，杂交瘤细胞融合率达到 79%，克隆阳性率达到 37.4%。 
    （3）将融合后的细胞利用选择培养基和 ELISA 方法进行筛选，经有限稀释法进行 4 次克隆化培养，成功的筛选出 3 株杂交瘤细胞株，并且可以成功的分泌抗耐热菌抗体，命名为 B5，E9，F11。经检测 3 株细胞培养上清抗体效价分别为 1:25600，1:51200，1:51200，为高亲和力抗体。