题目：人肺癌细胞CPP32基因的克隆及表达

　　从人肺癌细胞株A549中提取了细胞mRNA.反转录合成cDNA 第一链，再以此cDNA 为模板进行PCR，得到了长约840bp的CPP32蛋白酶基因，该DNA用 EcoRI、BamHI双酶切后，插入经EcoRI、BamHI双酶切得PBV220载体中，DNA序列分析表明，该基因有国外报道的编码CPP32аp20亚单位和编码CPP32βp10亚单位的核酸组成。将获得的CPP32基因分别克隆至经Xbal酶切、绿豆芽核酸酶消平、BamHI酶切的pBV321载体和经EcoRI、pBV321/CPP和pEX31B/CPP分别转化到E.coliDH5а和E.coli537中 Northern Blot表明 CPP32基因在转录水平得到了表达，进行 SDS-PAGE也证实，均获得了该基因在翻译水平的较高表达。表达产物主要以包涵体形式存在。CPP32基因导入大肠杆菌 后明显抑制了大肠杆菌的生长，提示人源CPP32功能上的保守性。CPP3基因的克隆及表达，为进一步纯化、制备抗体、研究蛋白酶与蛋白酶之间相互作用等功能打下了基础。