● 摘要
桑黄是珍贵的药用真菌，其所含有的多糖成分具有抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，但由于受到气候、温度等因素的影响，在自然界，野生桑黄子实体一般很难形成，目前人工栽培技术还不成熟。通过液体发酵技术培养获得桑黄子实体及其产物非常重要。本论文通过液体发酵技术获得桑黄菌丝体，并分离和纯化获得了两种纯品多糖，进一步系统研究了这两种多糖的理化性质、初步结构及生物学活性。又对本实验室已获得的两种桑黄胞外多糖进行了初步结构解析和体内抗氧化功能研究；这些研究对进一步开发利用桑黄这种珍稀药用真菌的具有重要意义。本研究的主要结果如下：
1.为了获得高产量高活性桑黄菌丝体多糖，研究了新的提取工艺。通过优化比较热水浸提法、超声破碎法和低温低压法的多糖得率和总抗氧化活性，最终确定了最优的低温低压法提取条件。采用响应面优化法对低温低压法提取桑黄菌丝多糖的提取条件进行优化，优化后的提取条件为提取时间1.8 h、提取压力0.059 Mpa、提取液料比52.5：1，多糖得率达到4.41 %（相对湿菌丝体），总抗氧化活性达到6.33 mM。
2.将通过低温低压法提取获得的桑黄菌丝多糖，进一步处理获得菌丝体多糖粗品。对该粗多糖先依次进行去除蛋白、色素和无机盐等预处理。进而采用DEAE纤维素柱和琼脂糖凝胶柱依次进行进一步的分离纯化，并检测多糖纯度确认所获得的多糖为纯品多糖。分别命名为桑黄多糖SHJS1和多糖SHJS4纯化物。
3.对获得的桑黄菌丝体多糖纯化物进行了单糖组成、平均分子量、红外等理化性质研究，初步对其结构进行了解析。研究发现，SHJS1由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成，其摩尔比为3.92：1.96：4.03：0.88：2.03，平均分子量1.65×105；SHJS4的单糖组成为葡萄糖、半乳糖、岩藻糖，其摩尔比为1.00：0.61：0.83；平均分子量7.14×105。红外光谱分析确定，多糖SHJS1含有β糖苷键，两种多糖均为吡喃糖构型。
4.通过甲基化和核磁共振分析（1H、13C、1H-1HCOSY、TOCSY、HMQC、HMBC、NOESY谱）等手段推测得到：SHJS1的主链主要由(1→4)-ａ-D-Fucp，-(1→3,6)-а-D-Arap 和(1→2,4)-β-D-Galp连接构成，侧链由а-D-Manp 和а-D-Glcp构成；SHJS4由于粘度较大，尚未推测出该多糖的结构。
5. 对桑黄胞内多糖SHJS1和SHJS4进行小鼠体内的免疫活性研究，结果表明多糖SHJS1能明显提高小鼠血清中IL-4、IFN-а、IFN-γ的含量，多糖SHJS4能明显提高小鼠血清中IL-2、IFN-а、IFN-γ的含量。
6.对本实验室已获得的桑黄胞外多糖纯品SH1-3和SH4-1进一步进行了结构解析。通过甲基化反应、核磁共振分析推测得到多糖SH1-3的主链主要由(1→2,4)- а-D-Glcp和(1→2)-β-D-Manp构成，侧链由а-D-Glcp构成。多糖SH4-1的主链主要由(1→3)-а-D-Araf、(1→4)-β-D-Manp、(1→2,6)-а-D-Glcp及(1→6)-а-D-Galp构成，侧链由а-D-Glcp和а-D-Manp构成。
7.对桑黄胞外纯品多糖SH1-3和SH4-1进行了动物体内抗衰老活性研究。首先建立小鼠的D-半乳糖衰老模型，以VE治疗为阳性对照组，分别设置多糖SH1-3和SH4-1的低、中、高剂量组，给药30天后检测小鼠生理生化指标。结果发现：两种胞外多糖均可以提高小鼠血清中的超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性和抗氧化能力（TEAC），同时还可降低了小鼠肝脏中的褐质素含量，减少色素沉积；通过小鼠肝脏组织切片观察，发现该类多糖纯化物可降低D-半乳糖对肝细胞造成的损害。