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一、名词解释

1． Edman 降解法（gdmandegradation ）。

【答案】Edman 降解法，又称苯异硫氰酸酯法，是指从肽链的游离的

的序列的过程。末端测定氨基酸残基末端氨基酸被苯异硫氰酸酯（PITC ）修饰，然后从肽链上分离修饰的氨基酸，再用乙酸乙酯抽提后，可用层析等方法鉴定。余下一条缺少一个氨基酸残基的完整的肽链再进行下一轮降解鉴定循环。

2． 胞吐（作用）。

【答案】胞吐是指分泌的物质被包裹在脂囊泡内，与质膜融合，然后将物质释放到细胞外空间的过程。

3． 级联系统。

【答案】级联系统是指在一个连锁反应中，当一个酶受到激活后，其他酶依次被激活，引起原始信号的放大的连锁反应。

4． （苹果酸-天冬氨酸穿梭）。 【答案】（苹果酸-天冬氨酸穿梭）是指转运胞质的还原性氢进入线粒体，

参与氧化磷酸化的穿梭代谢途径。草酰乙酸接受胞质

粒体，在线粒体中重新氧化成草酰乙酸，生成的

冬氨酸的形式回到胞液，完成穿梭。

5． 开放读框（open reading frame）。

【答案】从密码。

6． 起始密码子。

【答案】起始密码是指指定蛋白质合成起始位点的密码子。最常见的起始密码子是蛋氨酸密码：AUG 。

至方向，由起始密码子AUG 开始至终止密码子的一段mRNA 序列，为一段连续的氨基酸序列编码。开放读框内每3个碱基组成的三联体，为决定一个氨基酸的遗传脱氢，转变为苹果酸进入线进入呼吸链，草酰乙酸通过转氨反应以天

7． 类脂。

【答案】类脂是指除脂肪以外的其他脂类，包括磷脂类、固醇类等。

8． 切除修复

【答案】切除修复 又称核苷酸外切修复，是一种恢复紫外线等辐射物质所造成的损伤部位的暗修复系统。此系统是在几种酶的协同作用下，先在损伤的任一端打开磷酸二酯键，然后外切掉一段寡核苷酸，留下的缺口由修复性合成来填补，再由连接酶将其连接起来。

二、问答题

9． 一种氨基酸所对应的密码子种类数与这种氨基酸在蛋白质中出现的频率有何关系? 这种关系的优点是什么？

【答案】密码子种类较多的氨基酸在蛋白质中出现的频率也较高。密码子的简并性使碱基替换有可能不引起氨基 酸的替换，因此増大了突变在自然界得以保留的概率。

10．什么是酶的活性中心？它有哪些特点？胰凝乳蛋白酶的活性中心主要由哪三个氨基酸残基组成？

【答案】（1）酶的活性中心是指酶分子中直接和底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。

（2）特点：①具有三维空间结构；②只占微小区域，并形成凹穴；③是辅因子结合的部位；④包括结合和催化两个功能部位。

（3）胰凝乳蛋白酶的活性中心包括的三个氨基酸残基为

11．生物体内嘌呤核苷酸有两条完全不同的合成途径，试简述两条途径的名称和特点。

【答案】嘌呤核苷酸的从头合成利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及甲酰基（来自四氢叶酸）等简单物质为原料，经过一系列酶促反应，合成嘌呤核苷酸，称为从头合成途径。嘌呤核苷酸的从头合成在胞液中进行，反应步骤比较复杂，可分为两个阶段：首先合成次黄嘌呤核苷酸

|然后

再转变成腺嘌呤核苷酸与鸟嘌呤核苷酸

利用体内游离的嘌呤或嘌呤核苷，经过简单的反应过程，合成嘌呤核苷酸，称为补救合成（或重新利用）途径。嘌呤核苷酸的补救合成有两种酶参与，即腺嘌呤磷酸核糖转移酶和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶。由5-磷酸核糖-1-

焦磷酸

的补救合成。

12．维生素的特点是什么？

【答案】维生素是一类维持机体正常生命活动所必不可少的低相对分子质量有机化合物。机体对其需要量很少。但由于机体不能合成或合成量不足，所以必须从食物中摄取。

提供磷酸核糖，它们分别催化

和

13．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？

如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？

你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的

种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条

小的条带。这一次染色方法是什么？为什么

会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？

【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。

（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。

（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。

为了将的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，可使用凝胶过滤层析。的核糖核酸酶应该先流出来。

14．怎样确定双向复制是DNA 复制的主要方式，以及某些生物的DNA 采取单向复制？

【答案】通过放射自显影方法，在复制开始时，

先用低放射性的

菌。经数分钟后，

再转移到含有高放射性的

制起始区的放射性

标记密度比较低，感光还原的银颗粒密度就较低；继续合成区标记密度较高，银颗粒密度也较高。对于枯草杆菌、某些噬菌体和高等真核细胞的染色体等许多DNA 来说，都是双向复制，所以银颗粒的密度分布应该是中间密度低，两端密度高；而对于大肠杆菌噬菌体质体和真核细胞线粒体等某些DNA 来说，复制是单向的，则银颗粒的密度分布应该是一端高、一端低。 的培养基中继续标记。这样在放射自显影图上，复标记大肠杆大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这