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一、名词解释

1． 解偶联剂。

【答案】解偶联剂是指氧化磷酸化的一类抑制剂，使氧化与磷酸化脱离，氧化仍可以进行，而磷酸化不能进行。解偶联剂为离子载体或通道，

能増大线粒体内膜对

梯度，

因而无

酚

2．

活性中心的通透性，消除浓度生成，同时使氧化释放出来的能量全部以热的形式散发。例如，2，4-二硝基苯

【答案】活性中心是指酶分子上与底物结合并直接催化底物变成产物的区域，它是一种三维实体结构，呈裂缝、裂隙或口袋状。

3． 尿素-梓檬酸双循环（krebsbicycle ）。

【答案】尿素-柠檬酸双循环是尿素循环和柠檬酸循环密切联系在一起的循环途径。在尿素循环中生成的延胡索酸，使尿素循环和柠檬酸循环密切联系在一起。精氨玻珀酸裂解生成的延胡索酸可转变为苹果酸，苹果酸进一步氧化生成草酰乙酸，草酰乙酸既可进入柠檬酸循环，也可经转氨作用再次形成天冬氨酸进入尿素循环。

4．

【答案】

5．

【答案】

苷酸序列，

并断开每条链的一个磷酸

酶

6． DNA 二级结构。

【答案】DNA 的二级结构是指两条DNA 单链通过碱基互补配对的原则，所形成的双螺旋结构。

是指核酸分子在发生热变性的时候，有一半双螺旋被破坏时候的温度。 （限制性内切酶）。 （限制性内切酶）时是指一类能识别双链DNA 中特定的核的DNA 内切酶，时细菌限制修饰系统的重要部分，可防止外源DNA 的入侵。目前发现了三类限制性内切酶，其中第二类酶是基因工程重要的工具

7． 酶的化学修饰调节。

【答案】酶的化学修饰调节是指酶蛋白肽链上某些残基在酶的催化下发生可逆的共价修饰，从而引起酶活性的改变。

8． 苹果酸穿梭系统。

【答案】苹果酸穿梭系统需要两种谷-草转氨酶、两种苹果酸脱氢酶和一系列专一的透性酶共同作用。首先，NADH 在胞液苹果酸脱氢酶的催化下将草酰乙酸还原成苹果酸，然后穿过内膜，经基质苹果酸脱氢酶氧化，生成草酰乙酸和NADH , 后者进入呼吸链进行氧化磷酸化，草酰乙酸则在基质谷-草转氨酶催化下形成天冬氨酸，

同时将谷氨酸变为

二酸生成的谷氨酸又返回基质。

酮戊二酸，天冬氨酸和酮戊二酮戊酸透过内膜进入胞液，再由胞液谷-草转氨酶催化变成草酰乙酸参与下一轮穿梭运输，同时

二、问答题

9． 假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？

如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？

你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的

种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条

小的条带。这一次染色方法是什么？为什么

会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？

【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。

（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。

（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。

为了将

的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，

可使用凝胶过滤层析。

大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这的

核糖核酸酶应该先流出来。

10．什么是遗传密码？简述其基本特点。

【答案】（1）密码子是mRNA 中核苷酸与蛋白质中氨基酸之间的对应关系，连续的3个核苷酸为一个密码子，决定一个氨基酸。标准的遗传密码是由64个密码子组成的。

（2）特点：①通用性；②方向性；③简并性；④读码的连续性；⑤密码的变偶性；⑥64组密码中有3组为 终止密码子（UAA 、UAG 、UGA ），有一组既是Met 的密码子，又是起始密码子（AUG ）。

11．在酶活力测定中，如何保证测定的是酶反应初速度？

【答案】在酶活力测定中，为保证测定的是酶反应初速度，通常以底物浓度的变化在起始浓度的5%以内的速率为初速度。底物浓度太低时

，

说却是一级反应。

12．简述酶的催化机制。

【答案】（1）酶利用其与底物之间通过非共价键（氢键、巯基相互作用、离子键）结合所释放出的能量（结合能）降低了酶促反应的活化能。结合使酶具备了巨大的催化能力和高度的专一性。

（2）酶与底物的非共价结合在过渡态中达到了最优化。从本质上说，酶的活性中心并非最适于与底物结合，而是最适于与过渡态类似物相结合。

（3）在催化反应瞬间，酶的催化基团与过渡态类似物之间形成瞬时的共价键，或是底物将某个基团瞬时转

13．食入缺乏必需氨基酸甲硫氨酸的食物，除了不能合成足够的蛋白质外，还会造成什么后果？

【答案】甲硫氨酸的缺乏将会抑制需要S-腺苷甲硫氨酸的所有反应。这里值得注意的是由于甲硫氨酸的缺乏因而不能从磷脂酰乙醇胺合成磷脂酰胆碱。

14．什么叫别构效应？以血红蛋白为例说明别构效应与蛋白质功能的关系。

【答案】别构效应是指生物体中具有1个以上亚基的蛋白质，在不同生理过程中，当其中一个亚基与小分子物质结合后，不仅该亚基的立体结构发生变化，而且随即引起其他亚基在立体结构上发生相应变化，从而最终改变蛋白质生物活性的现象，别构效应是生物体代谢调节的重要方式之一。

血红蛋白有四个亚基，

它们都是多次折叠卷曲起来的肽链。两个为链，

两个为链。以表示。脱氧血红蛋白由于分子内可形成八对盐桥，分子的构象受到约束，较为稳定，因而和氧的

结合能力弱。当一个

亚基和

暴露出来，

使得一个结合后部分盐桥被破坏，某些氨基酸发生移位，与氧结合点随即的亲和力增加，

而当这一对

亚基与结合后，就

以下的底物浓度变化在实验上不易测准，所以在测定酶活力时，往往使底物浓度足够大，这样整个酶反应对底物来说是零级反应，而对酶来亚基构象改变，

对