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一、名词解释

1． Transcriptome

【答案】转录组。转录组是指一个活细胞所能转录出的所有niRNA ，即基因组DNA 转录的基因总和。研究转录组的一个重要方法是利用DNA 芯片技术检测机体中基因组的表达。

2． Telomerase

【答案】端粒酶。端粒酶是指由蛋白质和RNA 两部分组成的一种反转录酶，其中RNA 作为模板序列，指导合成染色体末端的端粒DNA 的重复序列片段。

3． 操纵子

【答案】操纵子是指原核生物基因中，多个功能上相关的结构基因串联排列在基因组序列中，构成信息区，连同上游启动区和操纵基因区及下游转录终止区一起构成的基因表达单位。

4． YAC

【答案】酵母人工染色体。酵母人工染色体是指一种能够克隆长达400Kb 的DNA 片段的载体，含有酵母细胞中 必需的端粒、着丝点和复制起始序列，可用于基因组大片段库构建。

5． 分子伴侣（molecular chaperone）

【答案】分子伴侣是指一类序列上没有相关性但有共同功能的保守性蛋白质，它们在细胞内能帮助其他多肽进行正确的折叠、组装、运转和降解，如热休克蛋白。

6． 双向电泳

【答案】双向电泳是指将样品进行电泳后，在它的直角方向再进行一次电泳，为了不同的目的而采用不同的组合 方式的分离方法，目前双向电泳大多是指第一向为等电聚焦，平衡后，第二向为SDS 电泳。

7． 单顺反子mRNA （monocistronic mRNA）和多顺反子mRNA （polycistronic mRNA）。

【答案】单顺反子mRNA 是指能翻译成一条肤链的信使核糖核酸（mRNA ）来自单顺反子;

，多顺反多顺反子mRNA 是指两个以上相关基因串在一起转录所得到的信使核糖核酸（mRNA ）

子mRNA 一般可同步翻译产生功能相关的多个蛋白质或酶。

8． SDS 电泳（SDS-PAGE ）

【答案】SDS 电泳（SDS-PAGE ）是指根据SDS 和还原试剂将蛋白质分子解聚后亚基的大小，在恒定pH （碱性） 缓冲系统中分离的方法，主要用于测定蛋白质亚基分子质量。

9． 蛋白质组（proteome ）

【答案】蛋白质组是指一种生物或一个细胞、组织所表达的全套蛋ft 质（protein ）, 即包括一种细胞乃至一种生 物所表达的全部蛋白质。

10．反式剪切（Trans-splicing ）

【答案】反式剪切是指一种保守的mRNA 加工机制，已经在包括原生动物和多细胞动物等多种生物体中发现。SL 反式剪切是反式剪切的一种，是将一段相对保守的剪切引导序列（SL ）加到

前体mRNA 的5' 端作为一个外显子，从而提高成熟mRNA 的稳定性，并且可能参与翻译的起始。

二、简答题

11．简述RNA 转录的概念及其基本过程。

【答案】转录是指以DNA 的一条链为模板，在RNA 聚合酶的作用下，依据碱基配对原则，合成一条与DNA 模板链的一定区段互补的RNA 链的过程，即遗传信息、由DNA 流向RNA 的过程。

无论是原核细胞还是真核细胞，转录的基本过程都包括以下几个步骤:

（1）模板识别

模板识别是指RNA 聚合酶与启动子DNA 双链相互作用并与之相结合的过程。

（2）转录起始

①RNA 聚合酶全酶与启动子可逆性结合形成封闭复合物，此时的DNA 链仍处于双链状态; ②封闭复合物转变成开放复合物，聚合酶全酶结合的DNA 序列中有一小段双链被解开; ③开放复合物与最初的两个NTP 相结合并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键后转变成包括RNA 聚合酶、DNA 和新生RNA 的三元复合物。

（3）转录延伸

转录延伸阶段是RNA 聚合酶离开启动子，即6因子从全酶上脱离后，余下的核心酶沿模板DNA 链移动，并按照碱基互补原则，不断聚合RNA 的过程。

（4）转录终止

转录终止是指RN Α-DNA 杂合物分离，转录泡瓦解，DNA 恢复成双链状态，RNA 聚合酶和RNA 链都被从模板上释放出来的过程。即包括停止延伸及释放RNA 聚合酶和合成RNA 。

12．简述酵母单、双杂交系统的基本原理与应用。

【答案】（1）酵母单杂交系统。

①基本原理

将已知的特定顺式作用元件构建到最基本启动子（Pmin ）的上游，把报告基因连接到Pmin 下游。然后将编 码待测转录因子的cDNA 与已知酵母转录激活结构域（AD ）融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能够 与顺式作用元件相结合，就能激活Pmin 启动子，使报告基因得

到表达。

②应用

a. 用于检测已知DNΑ-蛋白质之间是否存在相互作用；

b. 用于分离结合于目的顺式调控元件或其他短DNA 结合位点蛋白的新基因；

c. 用于定位已经证实的具有相互作用的DNA 结合蛋白的DNA 结合结构域进一步准确定位与DNA 结合的核苷酸序列。

（2）酵母双杂交系统。

①基本原理

把编码已知蛋白的DNA 序列连接到带有酵母转录调控因子DNA 结合结构域编码区（BD ）的表达载体上。导入酵母细胞中使之表达带有DNA 结合结构域的杂合蛋白，与报告基因上游的启动调控区相结合，准备作为“诱 饵”捕获与已知蛋白相互作用的基因产物。此时，若将已知的编码转录激活结构域（AD ）的DNA 分别与待筛 选的cDNA 文库中不同插入片段相连接，获得“猎物”载体，转化含有“诱饵”的酵母细胞，一旦酵母细胞中 表达的“诱饵”蛋白与“猎物”载体中表达的某个蛋白质发生相互作用，不同转录调控因子的AD 和BD 结构域 就会被牵引靠拢，激活报告基因表达。分离有报告基因活性的酵母细胞，得到所需要的“猎物”载体，就能得到 与已知蛋白相互作用的新基因。

②应用

a. 用于研究蛋白质之间的相互作用。

b. 用于发现新的蛋白质和蛋白质的新功能；

c. 用于在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用；

d. 用于筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响；

e. 用于建立基因组蛋白连锁图。

13．什么是葡萄糖效应？

【答案】葡萄糖效应即降解物阻遏，是指在培养基中葡萄糖和乳糖（其他糖类类似）同时存在时，葡萄糖的代谢 产物阻遏了其他糖类操纵子激活复合物的形成，从而使得对应结构基因无法转录，最终影响乳糖的利用的现象。

14．简述原核生物和真核生物mRNA 的区别。

【答案】原核生物和真核生物mRNA 的区别表现在:

（1）特异性结构不同:真核生物的5' 端有帽子结构，大部分成熟的mRNA 还同时具有3' 一多聚A 尾巴，而原核生物一般没有这两种结构;

（2）编码能力不同:原核生物的mRNA 可以编码多个多肤，真核生物的只能编码一个;

（3）顺反子类型不同:原核生物常以多顺反子的形式存在，真核一般以单顺反子形式存在; （4）起始密码子存在差异:原核生物一般以AUG 作为起始密码，有时以GUG , UUG 作为起始密码，真核几乎永远以AUG 作为起始密码;