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一、名词解释

1． 亲和层析、离子交换层析。

【答案】亲和层析是指利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的层析技术。

离子交换层析是指使用带有固定的带电基团的聚合树脂或凝胶层析柱分离离子化合物的层析方法。

2．

限制酶图谱

【答案】限制酶图谱是指同一DNA 用不同的限制酶进行切割，从而获得各种限制酶的切割位点，由此建立的位点图谱，有助于对DNA 的结构进行分析。

3． 梓檬酸转运系统（citrate transport system）。

【答案】柠檬酸转运系统是指线粒体内的乙酰CoA 与草酰乙酸缩合成柠檬酸，然后经内膜上的三羧酸载体运至胞质中，在柠檬酸裂解酶催化下，需消耗A TP 将柠檬酸裂解回草酰乙酸，后者就可用于脂酸合成，而草酰乙酸经还原后再氧化脱羧成丙酮酸，丙酮酸经内膜载体运回线粒体，在丙酮酸羧化酶作用下重新生成草酰乙酸，这样就可又一次参与转运乙酰CoA 的循环。

4． 单纯酶、结合酶。

【答案】单纯酶是指一些只由蛋白质组成，不包含辅因子的酶；

结合酶是指结合有辅因子的酶。

5． 糖原分解。

【答案】糖原分解是指糖原分解成葡萄糖或葡萄糖-1-磷酸的过程。

6． 信号识别颗粒（signal recognition particle）。

【答案】信号识别颗粒是在真核细胞的胞质内存在的一种由小分子RNA （7S rRNA ）和6种不同蛋白质共同组 成的复合物，它能特异地识别和结合信号肽，并与核糖体结合，暂时阻断多肽链的合成，进而与内质网外膜上的 SRP 受体结合，信号肽就可插入内质网进入内腔，被内质网内膜壁上的信号肽酶水解。SRP 与受体解离并进入新 的循环，而信号肽后继肽段也进入内质网内腔，并开始继续合成多肽链。SRP 使分泌性蛋白及早进入细胞的膜性 结构，能够正确的折叠、进行必要的后期加工与修饰并顺利分泌出细胞。

7． 酶活性的可逆磷酸化调节。

【答案】酶活性的可逆磷酸化调节是指通过蛋白激酶催化的将A TP 或CTP 的位磷酸基转移到

底物蛋白质氨基酸残基上以及在蛋白磷酸化酶催化下的逆过程，从而使酶蛋白在活性状态与非活性状态之间互变，来调节酶的活性

8． 寡聚酶。

【答案】寡聚酶是指由两个或两个以上亚基组成的酶。寡聚酶中的亚基可以是相同的，也可以是不同的。亚基间以非共价键结合，容易用酸碱、高浓度的盐或其他的变性剂分离。寡聚酶的相对分子质量可以达到几百万。

二、问答题

9． Matthew Meselson和Franklin Stahl为了验证DNA 复制的半保留复制，设计了一个非常巧妙的实验：

将大肠杆菌先放到含有

子几乎都是

的培养基中连续培养15代，以使细胞内的DNA 上的N 原

的培养基上继续培养数代。分别分离各代细胞的DNA ，

的培养基中培养的大然后将大肠杆菌改放在再使用CsCl 密度梯度离心方法分析各代DNA ，并比较各代细胞DNA 在离心管中的相对位置。最终确定了DNA 复制的确遵循半保留规则。如果修改 验方案：

将本来在

肠杆菌细胞，直接改放在的培养基中继续培养数代，同样抽取各代细胞中的DNA ，通过密度

，那么实验结果能否证明DNA 的 半保留复制？ 梯度法离心分析各代DNA 在离心管中的相对位置

【答案】不能。因为DNA 母链是高度甲基化的，而新生链甲基化程度较低，或者还没有来得及甲基化，如果直

接将大肠杆菌从

为培养基改放在的培养基上培养，则子链的DNA 会因的参入，浮力密度会提高，但原来的母链因为甲基化，其相对密度会比未甲基化的DNA 高，两种因素作用正好抵消，使得不同代数的DNA 不容易分开。

10．测定酶活力时为什么要测定反应的初速度? 并且常以测定产物的增加量为宜?

【答案】在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准 确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应 速度较为合适。测初速度的另一个原因是避免产物的反馈抑制。

11．某些蛋白质激酶只有在其活性中心的Ser 或Thr 磷酸化才有活性。有人使用定点突变的技术将上述激酶相应的Ser 或Thr 突变成Glu 后，发现也有活性了，请你给出合理的解释。如果人类细胞发生这样的突变，会有什么样的后果，为什么？

Ser 或Thr 因为磷酸化导致其构象发生变化而被激活，构象变化的根本原因是磷酸基【答案】

团带有负电荷，如果Ser 或Thr 突变成Glu , 因为Glu 的侧链基团也带负电荷，而且其大小与磷酸化的Ser 差不多，故也可能引起类似的构象变化，而导致酶被激活。

这种激活将会是组成型激活，因为它不像磷酸化的Ser 或Thr , 可以被磷酸酶水解掉带负电荷

的磷酸基团，所以后果将会一直导致细胞内它作用的靶蛋白的磷酸化，从而使细胞功能紊乱，甚至导致细胞癌变或死亡。

12．简述血氨的来源与去路。

【答案】（1）血氨的来源包括：①氨基酸及胺分解产生的氨。②肠道吸收的氨包括肠道氨基酸被肠道细菌作用产生的氨和肠道尿素经肠道细菌脲素酶水解产生的氨。③肾小管上皮细胞分泌的氨，是由谷氨酰胺酶水解谷氨酰胺产生。

（2）血氨的去路有：①合成尿素。②合成非必需氨基酸。③合成其他含N 化合物。

13．假定你决定从一种新的生物Streptococcus bartelium体内纯化核糖核酸酶，你选择盐析作为纯化的第一步，随着你JJnA 硫酸铵到细胞裂解物之中，进行分级分离。如果你添加的盐浓度是0.5mol/L、lmol/L、1.5mol/L、2mol/L、和2.5mol/L，你如何确定你要的蛋白质在哪一级分离沉淀之中？

如果你选择离子交换层析作为纯化核糖核酸酶的第二步，同样需要确定哪一部分含有目标蛋白。你会使用哪一种离子交换树脂? 为什么? 你如何从交换树脂中洗脱下你的目标蛋白？

你将纯化的蛋白质走SDS-PAGE ，在考马斯亮蓝染色以后，你看到一条单一的

种蛋白质是一种核糖体蛋白，于是你决定再进行一次蛋白质染色，这一次你发现了一条

小的条带。这一次染色方法是什么？为什么

会多显示出新的条带，你如何分离这两种蛋白质？

【答案】（1）在纯化蛋白质过程中，首先需要建立一种测定活性的方法。测定核糖核酸酶活性的方法是利用其将RNA 降解成单个核苷酸的活性。使用放射性标记的NTP ，可转录出带放射性标记的RNA 。以此作为核糖核酸酶的底物，将其与含有酶的部分保温，然后用TCA 沉淀，再使用特定的滤膜过滤，通过测定流过滤膜的带有同位素标记的核苷酸的放射性，可测定出纯化物中酶活性的高低。

（2）既然核糖核酸酶的底物是磷酸核糖骨架带负电荷的RNA , 核糖核酸酶本身很可能带正电荷。因此，可考虑阳离子交换树脂来纯化核糖核酸酶。在低盐浓度下上柱，以吸附核糖核酸酶，然后用高盐缓冲液洗脱出核糖核酸酶。

（3）考马斯亮蓝染色的灵敏度仅能检测出含有大约lOOng 的条带，而银染的灵敏度达10ng 。所以使用考马斯亮蓝染色看不到的条带有可能通过银染看到。

为了将

的核糖体蛋白与的核糖核酸酶分开，

可使用凝胶过滤层析。的核糖核酸酶应该先流出来。

大小的大条带。为了确定它是不是核糖核酸酶，你决定将条带切下，然后测序。然而，你吃惊的发现，这