题目：高糖环境下内皮细胞表型变化的研究

    本课题的目的是研究高糖培养对内皮细胞表型变化的影响。探索高糖引起内皮细胞表型变化的机制，为进一步深入研究内皮细胞间质转化过程打下基础。

     内皮细胞用RPMI 1640培养基培养。分为对照组、30 mM高糖组、60 mM高糖组和120 mM高糖组等4组。四组细胞培养24h、48h和72h后，取细胞培养上清液，氧化酶法检测其中的葡萄糖含量；CCK-8检测内皮细胞活性；培养24h、48h、72h或7d后，查看并拍摄各组细胞；RT-PCR检测7d后的CD31、VE-钙粘连蛋白、a-SMA、I型胶原蛋白和24h、72h后的转化生长因子TGF-β1的mRNA水平；免疫荧光细胞染色法检测7d后的CD31、a-SMA的蛋白表达情况；维持24h、72h后，取各组细胞上清液，ELISA方法测出其中的TGF-β 1含量。

      各组细胞培养72h内上清液中的葡萄糖浓度未显著下降。60mM、120mM高糖组：24h、48h和72h后，内皮细胞活性显著降低；24h、72h后，内皮细胞TGF-β 1mRNA转录水平和蛋白分泌量均显著增加；7d后，内皮细胞失去细胞间连接，失去铺路石样形态，梭形细胞比例显著增加；内皮细胞标志基因CD31、VE-钙粘连蛋白mRNA和CD31蛋白表达显著下调，间质细胞标志基因a-SMA、I型胶原蛋白mRNA和a-SMA蛋白合成显著上调；30mM高糖组：24h后内皮细胞活性显著降低，其余实验中结果与对照组无明显差异。

      结果发现60mM和120mM高糖组可引起内皮细胞的表型发生间质细胞样转化，高浓度葡萄糖促进内皮细胞TGF-β 1表达和自分泌增加是内皮细胞发生间质转化的重要原因。高糖刺激内皮细胞TGF-β表达增强的内在机理有待进一步研究。