● 摘要
根皮素作为二氢查尔酮中主要化合物，具有抗氧化衰老、抗肿瘤、提高免疫力、降血糖等多种功效，被广泛应用于食品药品等行业；其中在化妆品行业中，由于根皮素具有强的清除自由基能力，因此被主要用作美白祛斑添加剂。同时，据报道，胆碱在肠道菌群的作用下可以产生三甲胺（TMA），而TMA在肝脏中进一步被氧化成氧化三甲胺（TMAO），TMAO能够减缓或者降低血管内胆固醇等脂质物质的移出速度，导致血管内皮损伤，从而加速动脉粥样硬化的产生。
鉴于此，本实验选择根皮素单体作为实验材料，对根皮素血管内皮生理功能和肝损伤保护进行研究。通过体内、体外两部分研究，全面而深入的研究根皮素在机体血管生理方面的功效和机制。
本实验研究的主要结果如下：
连续10周喂养小鼠含有3%的高浓度胆碱水溶液后，血清和肝组织匀浆的生化分析发现，高浓度胆碱水溶液能够导致小鼠的血脂水平呈现上升的趋势，血管内皮系统和肝脏发生炎症反应，受到损伤。然而，每天灌胃一次100，200和400 mg/kg·bw的根皮素可使小鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、内皮素-1（ET-1）、低密度脂蛋白（LDL）、血栓素B2（TXB2）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的含量水平与单独饮用高浓度胆碱的模型组小鼠相比都有所降低；而高密度脂蛋白（HDL）、一氧化氮（NO）和6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的含量与模型组相比有不同程度的升高。
同时，连续10周的3%的高浓度胆碱水溶液喂养小鼠后，测定模型组小鼠肝脏组织匀浆中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性与游离脂肪酸（NEFA）、丙二醛（MDA）的含量水平，与正常组均有所改变，可进一步反映出高浓度胆碱能够导致小鼠肝脏损伤和血管内皮系统的失调和损伤；而后，给予小鼠不同剂量的根皮素，明显发现上述指标有了大幅度的改善，且随着根皮素的剂量增加改善作用越明显。此外，肝组织的H&E和油红（Oil Red O）染色病理学观察，证实了摄入高浓度胆碱能引起肝脏的病理学病变，肝细胞内有脂肪堆积，细胞出现萎缩，部分的细胞坏死，相反根皮素则展现了良好的肝保护作用，而且随着给药剂量的增加也有明显的改善。这些实验发现证明3%高浓度胆碱能引起肝脏的损伤和血管内皮系统的损伤，而根皮素能够有效缓解这些症状。
（3）为了进一步探讨根皮素对血管内皮失调和损伤的保护作用的分子机制，采用体外高浓度氧化三甲胺（TMAO）培养血管内皮细胞（HUVEC）建立损伤的内皮细胞模型，观察根皮素对0.4 mmol/L的TMAO培养的HUVEC存活率及细胞形态的影响；检测细胞培养上清液中NO和ET-1水平，HUVEC的凋亡情况用流式细胞进行了检测，同时采用DAPI染色，综合对比细胞凋亡情况。结果表明了，高浓度0.4 mmol/L TMAO溶液可以降低细胞上清液中NO水平和增加ET-1含量，分别从正常组的16.09 ± 1.10 μmol/gprot和2.81 ± 0.20 pg/mL改变至模型组的7.14 ± 1.02 μmol/gprot和6.12 ± 0.38 pg/mL (p<0.01)。Annexin V-FITC/PI检测根皮素保护后的HUVEC存活情况，经TMAO作用24 h之后，出现了23.6 %的凋亡率，细胞的存活率为76.23 %，然而，连同根皮素一起作用后，HUVEC凋亡的情况得到了改善，细胞存活率分别为79.52 %，82.97 %和86.80 %。DAPI染色发现，凋亡的HUVEC出现了凋亡小体，细胞核出现一定程度的损伤和皱缩；而12.5，25和50 μmol/L三个浓度的根皮素能轻度提高TMAO培养的HUVEC的存活率，恢复细胞形态，降低细胞上清液中ET-1的含量和升高NO的水平，抑制TMAO引起的HUVEC凋亡。这些结果说明根皮素能够通过调节NO及ET-1表达，平衡NO系统功能，保护HUVEC免受高浓度TMAO诱导的损伤。
本实验首次发现了根皮素能够抑制高浓度胆碱引起的血管内皮功能失调和损伤和肝损伤的发生，同时结合体外实验，通过更深入的机理分析，阐述了根皮素保护血管内皮细胞损伤的机制，这为充分开发和研究根皮素作用及药理活性具有积极意义，同时为开发新型无毒副作用的根皮素类心血管保护药物提供了科学依据。