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一、名词解释

1． 顺式作用元件

【答案】顺式作用元件是指与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别并结合的特异DNA 序列，包括启动子、上游启动子元件、增强子、沉默子等。

2． 核酸分子杂交（hybridization ）

【答案】核酸分子杂交是指应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA （或RNA ）片段，按碱基互 补关系形成杂交双链分子的一项实验技术，杂交双链可以在DNA 与DNA 链之间，也可在RNA 与DNA 链之间 形成。

3． Intein

【答案】内含肽。内含肽是指存在于某些蛋白质前体肽链内部的一些肽段在转变为成熟蛋白质时，通过非酶促的转肽反应被切除，与其对应的是保留于成熟蛋白质中的外显肽。这些肽段具有核酸酶活性。

4． 转录单位（transcription unit）

【答案】转录单位是指从转录起始位点到转录终正位点所对应的、作为RNA 聚合酶模板的基因序列范围，可以是单一基因，也可以是多个基因。一个转录单位就是从启动子到终止子的一段序列，是一段以一条单链RNA 分子为表达产物的DNA 片段，这是转录单位的重要特征。

5． YAC

【答案】酵母人工染色体。酵母人工染色体是指一种能够克隆长达400Kb 的DNA 片段的载体，含有酵母细胞中 必需的端粒、着丝点和复制起始序列，可用于基因组大片段库构建。

二、简答题

6． 简述原核生物和真核生物mRNA 的区别。

【答案】原核生物和真核生物mRNA 的区别表现在:

（1）特异性结构不同:真核生物的5' 端有帽子结构，大部分成熟的mRNA 还同时具有3' 一多聚A 尾巴，而原核生物一般没有这两种结构;

（2）编码能力不同:原核生物的mRNA 可以编码多个多肤，真核生物的只能编码一个;

（3）顺反子类型不同:原核生物常以多顺反子的形式存在，真核一般以单顺反子形式存在; （4）起始密码子存在差异:原核生物一般以AUG 作为起始密码，有时以GUG , UUG 作为起始密码，真核几乎永远以AUG 作为起始密码;

（5）半衰期不同:原核生物mRNA 半衰期短，真核生物的mRNA 半衰期长;

（6）转录翻译的时序性不同:原核生物mRNA 的转录与翻译一般是同时进行的，而真核生物转录的mRNA 前体则需在转录后加工，成为成熟的mRNA ，且转录和表达发生在不同的时间和空间范围内。

7． 简述双脱氧链终止法进行DNA 测序的原理和方法。

【答案】（1）原理：双脱氧的核苷酸是人造的分子，

这种分子糖环的轻基基团，而在天然分子中糖环的

基互补配对原则是天然三磷酸核苷酸，用它的但是，若进入的核苷酸是双脱氧的，则由于

复制终止。

（2）方法：将待测序的单链DNA 的模板、引物、四种单脱氧碱基和DNA 聚合酶分成四管，在四管反应系 统中分别按比例引入四种双脱氧碱基，只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧碱基的片段

可继续延长。如此每管反应体系中便合成以共同引物为

脱氧碱基为

不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个碱基），根据片段

端，以双端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后，分四个泳道进行电泳，以分离长短端的双脱氧碱基，便可依次阅读合成和碳上都没有了g 基连接。碳上有一个羟基。在DNA 复制过程中，新掺入的碱基按碱磷酸基团同生长链的前一个核苷酸的没有羟基而影响下一个磷酸二酯键的形成，导致DNA 片段的碱基排列顺序。

8． 试述RNA 生物合成的一般步骤及真核mRNA 的成熟加工过程。

【答案】（1） RNA 合成步骤：

①模板的识别。RNA 聚合酶结合到启动子序列上，结合部位DNA 双链局部解旋，形成转录泡；

②转录起始。合成RNA 链的最初2~9个核苷酸；

③转录延伸。RNA 聚合酶沿着DNA 分子链向前移动，解链区也随之移动，新生RNA 链不断增长并与模板 链在解链区形成RNΑ-DNA 杂合分子，其后DNA 恢复双螺旋；

④转录终止。RNA 聚合酶在Nus 因子等帮助下识别终止信号，释放聚合酶等转录相关蛋白。

（2）真核mRNA 成熟加工过程：

①新生mRNA 前体分子5端加上甲基化鸟苷酸帽，通常在转录完成前进行；

②RNA 聚合酶转录至终止信号处即有特异核酸内切酶将新合成的RNA 链切下，在3' 端加上一段polyA 尾；

③mRNA 的剪接，切除内含子并将外显子拼接；

④mRNA 内部还可发生甲基化，某些特殊情况下可保证mRNA 被重新编辑。

9． 简述双向电泳研究蛋白质组的优缺点。

【答案】（1）优点: ①双向电泳技术，特别是固相pH 梯度等电聚焦为第一向的双向电泳技术是当前分辨

率最高，信息 量最大的电泳技术。目前，一次双向电泳最高可达11000个蛋白点的分辨率；

②双向电泳能将组织和细胞中成千上万种蛋白高分辨，高灵敏的分离以满足随后的质谱分析，结合质谱鉴定 技术可査明大型蛋白复合物各组分，与其他生物技术相结合，可以快速准确地发现和鉴定新的蛋白质。

（2）缺点:

①低拷贝蛋白质的鉴定受限；

②极酸或极碱蛋白的分离比较困难； ③分子质量极大或极小蛋白的分离较难；

④难溶蛋白的检测比较困难；

⑤由于蛋白多样性的存在，很难确定一张正常状态的图谱作为病理状态的对照；

⑥重复性仍然不理想；

⑦得到高质量的双向凝胶电泳需要精湛的技术。

10．tRNA 在组成和结构上有哪些特点？

【答案】（1） tRNA 是由73〜93个核苷酸组成的单股RNA , 十分利于与单股的模板mRNA 进行酮基和氨基反应，形成氢键。

（2）含大量稀有碱基，如假尿嘧啶核苷

或D ）和胸腺嘧啶（T ）核苷等。

（3）所有的tRNA 二级结构为三叶草形，该结构的基本组成部分如下：

①3' 端含CC Α-OH 序列

因为该序列是单股突伸出来，并且氨基酸总是接在该序列腺苷酸残基（A ）上，所以CC Α-OH 序列称为氨 基酸接受臂。CCA 通常接在3' 端第4个可变苷酸上。3' 端第5〜11位核苷酸与5' 端第1〜7位核苷酸形成螺旋区，称为氨基酸接受茎。

②环

环是第一个环，由7个不配对的大基组成，

几乎总是含

与核糖体表面

的结合。

③额外环或可变环

这个环的碱基种类和数量高度可变，在3〜18个不等，往往富有稀有碱基^

④反密码子环

由7个不配对的碱基组成，处于中间位的3个碱基为反密码子。反密码子可与mRNA 中的密码子结合。毗 邻反密码子的3’端碱基往往为烷化修饰嘌呤，其5' 端为U ，即：-U-反密码子-修饰的嘌呤。

⑤二氢尿嘧啶环

由8〜12个不配对的碱基组成，主要特征是含有（2+1或2-1）个修饰的碱基（D ）。 ⑥上述的环，反密码子环，和二氢尿嘧啶环分别连接在由4或5个碱基组成的螺旋区上，

，各种甲基化的嘌呤和嘧啶核苷，二氢尿嘧啶（hU 序列。该环涉及tRNA