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题目:菘蓝不同部位提取物的成分分析及生物活性初探

关键词:菘蓝;脂溶性成分;挥发性成分;多糖;抑菌活性;抗氧化活性;DNA损伤保护作用。

  摘要


菘蓝(Isatis indigotica Fort.)别名大靛,是一种著名的药用植物。其根药材名称为“板蓝根”,叶为“大青叶”,具有清热解毒,凉血利咽等功效。现代药理研究表明,菘蓝提取物具有丰富的药理活性,例如抗菌、抗病毒、抗内毒素、调节免疫、抗炎、解热、抗血小板凝集、抗肿瘤和抗癌等作用。目前已报道的菘蓝植物的化学成分主要包括生物碱类、有机酸类、苷类、甾醇类、黄酮类和木脂素类化合物,对于其不同部位的脂溶性成分和挥发性成分的化学组成尚未有文献报道。板蓝根及其制剂在非典型性肺炎(SARS) 治疗过程中表现出了较好的疗效,揭示菘蓝植物提取物可能具有较强的抗菌、抗氧化活性,值得进一步深入研究。本论文以气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)为主要分析手段,对菘蓝植物不同部位的脂溶性成分和挥发性成分的化学组成进行了定性定量分析,进一步采用自由基清除体系和牛津杯法对菘蓝根和叶不同极性提取物和多糖的抗氧化活性及抗菌活性进行了初步评价,为菘蓝植物资源的充分开发和利用奠定了基础。主要研究方法与结果如下:
1、建立了菘蓝种子、根、茎和叶中挥发性成分的提取和分析方法。挥发性成分采用水蒸气蒸馏法进行提取,气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术进行定性定量分析。从种子中鉴定出17种挥发性成分(主要是十八烷8.18%和十五烷7.45%);根中鉴定出25种挥发性成分(主要是5-乙基-2-甲基-辛烷6.52%和5-甲基-十四烷3.13%);茎中鉴定出21种挥发性成分(主要是顺式-9,12-十八碳二烯酸甲酯29.2%和顺式十八-9-烯酸甲酯12.36%);叶中鉴定出34种挥发性成分(主要是十八碳-9,12-二烯酸甲酯25.95%和(Z)-9-十八烯酸甲酯13.58%)。
2、建立了菘蓝种子和根中脂溶性成分的提取和分析方法。利用索氏提取法分别提取菘蓝种子和根中的脂溶性成分,运用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对其成分进行了分析和鉴定。从种子中鉴定出11种脂溶性成分(主要是亚麻酸24.72%和芥酸23.9%),根中鉴定出16种脂溶性成分(主要是十八碳-9,12,15-三烯酸50.49%和十八碳-9,12-二烯酸25.99%)。
3、建立了菘蓝种子、根和叶的乙酸乙酯提取物和甲醇提取物的体外抗氧化活性评价体系。采用DPPH·自由基清除体系评价了菘蓝种子和叶的乙酸乙酯提取物和甲醇提取物对于DPPH·自由基的清除能力和抗氧化效果,结果表明:菘蓝乙酸乙酯和甲醇提取物清除DPPH·自由基的能力与提取物用量呈量效关系,菘蓝根的乙酸乙酯提取物的抗氧化活性明显优于其它提取物;检测了不同提取物对H2O2光解反应诱导质粒DNA损伤的保护作用,结果显示:不同提取物溶液对H2O2光解反应诱导质粒DNA损伤均有一定的保护作用,其中菘蓝叶的甲醇提取物的保护作用最强,与阳性对照芦丁相当。
4、建立了菘蓝种子、根和叶的乙酸乙酯提取物和甲醇提取物的抑菌活性评价体系。采用牛津杯法评价其种子、根和叶的乙酸乙酯提取物和甲醇提取物的抑菌活性,实验结果显示,乙酸乙酯和甲醇提取物对4种细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色葡萄球菌)均有不同程度的抑制作用,且两者活性相当,其中,枯草芽孢杆菌和白色葡萄球菌对菘蓝叶乙酸乙酯提取物最为敏感,其抑菌活性优于阳性对照盐酸四环素。
5、抽提菘蓝种子和叶中的多糖,采用DPPH·法检测其抗氧化能力,并测定其对质粒DNA的保护作用。菘蓝多糖与DPPH·自由基的反应能力与用量呈量效关系:随着菘蓝多糖用量的增加,其清除DPPH·自由基的能力也增加,而且种子中的多糖清除DPPH的能力强于叶中所含的多糖;菘蓝种子和叶中所含的多糖对于H2O2光解反应诱导的质粒DNA损伤具有一定的保护作用。