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一、名词解释

1． 转录后加工（post-transcription processing）

【答案】转录后加工是指新合成的较大的前体RNA 分子，经过进一步的加工修饰，转变为具有生物学活性的、成熟的RNA 分子的过程，主要包括剪接、剪切和化学修饰。

2． Attenuator

【答案】弱化子。弱化子是指当操纵子被阻遏时，RNA 合成终止，起终止转录信号作用的核苷酸序列。弱化子 对于基因活性的影响是通过影响前导序列mRNA 的结构而发挥作用的，其调节作用的是某种对应氨酰-tRNA 的浓度，典型例子是细菌中的色氨酸操纵子。

3． YAC

【答案】酵母人工染色体。酵母人工染色体是指一种能够克隆长达400Kb 的DNA 片段的载体，含有酵母细胞中 必需的端粒、着丝点和复制起始序列，可用于基因组大片段库构建。

4． 重组修复

【答案】重组修复是指遗传信息有缺损的子代DNA 分子从同源DNA 的母链上将相应的核苷酸序列移至缺口处，再合成新的序列来填补母链的空缺的修复过程，因为发生在DNA 复制之后，又称复制后修复。

5． 断裂基因

【答案】断裂基因是指在真核生物结构基因中，编码某一个蛋白质不同区域的各个外显子并不连续排列在一起， 而常常被长度不等的内含子所隔离，形成镶嵌排列的断裂方式。所以，真核基因常被称为断裂基因。

二、简答题

6． 简述新一代测序各平台的优点和缺点及适用领域。

【答案】见表。

表 新一代测序平台的优缺点及应用

7． 增强子的作用有哪些?

【答案】（1）增强效应十分明显。

（2）增强效应与位置和取向无关。

（3）大多为重复序列。

（4）增强效应一般具有组织或细胞特异性。

（5）没有基因专一性。

（6）许多增强子还受外部信号的调控。

8． 真核与原核生物基因转录有哪些差异?

【答案】真核与原核生物基因转录的差异有:

（1）RNA 聚合酶不同:原核生物只有一种RNA 聚合酶，而真核生物有3种以上RNA 聚合酶进行不同类型的转录，合成不同类型的的RNA ;

（2）初级转录产物不同:原核生物的初级转录产物大多是编码序列，而真核生物转录产物除了编码序列，还含有大量的内含子序列;

（3）转录后加工不同:原核生物的初级转录产物几乎无需加工就可直接作为翻译模板，而真核生物转录产物需经转录后加工，如剪接、修饰等，才能成为成熟的mRNA ;

（4）转录翻译的时序性不同:原核生物细胞中转录与翻译几乎是同步在细胞中进行，真核生物mRNA 的合成与蛋白质的合成则发生在不同的时空范畴内。

9． 假如某个基因突变长出两个尾巴的异常果蝇，但你不知道该表型涉及一个基因还是多个基因，你将如何 设计实验解决这一问题？请提出实验方案找到涉及这个性状的突变基因。

【答案】实验方案如下：

（1）选取尾巴发育正常的果蝇为对照组，选取尾巴发育异常的果蝇为实验组；

（2）分别提取两组果蝇的总RNA 构建cDNA 文库，然后进行序列比对，找出突变基因序列；

（3）根据获得的突变基因序列，借助基因敲除技术进行基因功能的研究，从而确定与表型变

异相关的基因数目。

10．简述原核生物DNA 的复制特点。

【答案】（1）原核生物双链DNA 都是以半保留方式遗传的，DNA 的复制在整个细胞周期都能进行;

（2）在复制起始、延伸和终止这三个阶段中主要的变化包括:双链的解开，RNA 引物的合成，DNA 链的延长，RNA 、引物的切除、填补缺口、DNA 片段的连接以及切除和修复错配碱基等;

（3）原核生物通常只有一个复制起点。

其复制起始点（OriC ）是含有3个13bp 的串联重复保守序列，以及4个由9bp 的保守序列组成的能结合DnaA 的起始结合位点;

（4）在起始点处解开形成复制叉，可以连续开始新的DNA 复制，一个复制单元多个复制叉，复制叉移动速度才良快;

（5）需要多种酶和蛋白质的协同参与，都涉及拓扑异构酶、解旋酶、单链结合蛋白、引物合成酶、DNA 聚合酶、连接酶等，DNA 聚合酶在组成和功能上与真核生物有很大的不同，原核的DNA 聚合酶III 复制时形成二聚体复合物，而真核的聚合酶保持分离状态;

（6）原核生物冈崎片段由DNA 聚合酶I 去除，以多联体的形式补齐末端，且原核生物的DNA 聚合酶I 具有5'-3' 外切酶活性。

11．正调控和负调控的主要区别。

【答案】原核生物的基因调控主要发生在转录水平上，根据调控机制的不同可分为负转录调控和正转录调控。正调控中，调节基因的产物是一种基因活性的激活物一一激活蛋白；负调控中，调节基因的产物是基因活性的一种阻遏物一一阻遏蛋白。

三、论述题

12．说说Gateway 大规模克隆技术原理及基本操作流程。

【答案】（1）基本原理

利用X 噬菌体进行位点特异性DNA 片段重组，实现不需要传统酶切连接过程，将基因快速克隆和载体间平行转移。

（2）基本操作流程

Gateway 大规模克隆技术包括TOPO 反应和LR 反应两步。

①TOPO 反应

将目的基因PCR 产物连入Entry 载体，载体上的CCCTT 被拓扑异构酶所识别，切开后通过与切口处的磷酸 基团形成共价键，将该酶偶联在载体上。加入PCR 产物后，载体上

载体。

②LR 反应

粘性末端攻击PCR 产物的互补性末端并与接头序列CACC 退火，使PCR 产物以正确方向连入Entry