题目：流动注射在线氧化荧光法药物分析研究及其应用

荧光分析法是一种传统的分析方法，它最大的特点是选择性好和灵敏度高，这使其在药物分析中发挥了极为重要的作用。但由于大多数的药物分子不具有或只具有弱的天然荧光，又在很大程度上限制了荧光法在药物分析中的应用范围。本研究论文根据氧化还原反应可使部分没有或只有弱天然荧光的药物生成强荧光产物的原理，结合流动注射固相反应器在线氧化、固相萃取和透析分离技术建立了在线氧化荧光法测定药物中和血样中盐酸硫利达嗪和甲氨蝶呤含量的新方法，并结合透析采样技术和在线过滤稀释技术分别进行了盐酸硫利达嗪与牛血清白蛋白结合作用的研究和甲氨蝶呤片剂溶出度的研究。
本研究论文内容共包括两章，即综述和研究报告。
第一章：氧化还原荧光法在药物分析中的应用（综述）
对近年来所发表的有关氧化还原荧光法在药物分析中应用的相关文献做了详尽的综述。
第二章：研究报告
一、流动注射在线氧化荧光法盐酸硫利达嗪分析体系研究
（一）流动注射在线氧化荧光法测定药物中盐酸硫利达嗪含量
本方法根据盐酸硫利达嗪的氧化产物具有强荧光这一性质，在磷酸介质中利用二氧化铅固相反应器在线氧化盐酸硫利达嗪并通过乙醇对其的增敏作用，建立了流动注射在线氧化荧光法测定盐酸硫利达嗪含量的新方法。将方法应用于片剂中盐酸硫利达嗪含量的分析，测定结果与药典法一致。结果表明该方法具有检出限低、线性范围宽、精密度好以及分析速度快等特点。
（二）固相萃取流动注射在线氧化荧光法测定人血样中盐酸硫利达嗪含量
固相萃取法和沉淀蛋白法是两种最常用的血样前处理方法。通过加标回收实验发现沉淀蛋白法存在系统误差，确定了固相萃取法为较好的方法。在上述实验的基础上结合固相萃取前处理技术成功的建立了人血样中盐酸硫利达嗪含量测定的新方法。并对五个不同实际人血样中盐酸硫利达嗪含量进行了测定，测定结果与高效液相色谱法进行了比较，结果与高效液相色谱法一致。
（三）流动注射氧化荧光法结合在线透析采样研究盐酸硫利达嗪与牛血清白蛋白结合作用
根据上述所建立的盐酸硫利达嗪含量测定方法，结合在线透析采样技术将蛋白以及结合药物的蛋白大分子和游离药物小分子分离，研究了盐酸硫利达嗪与牛血清白蛋白的相互结合作用。运用紫外、荧光光谱研究了盐酸硫利达嗪小分子与牛血清白蛋白相互作用，基于荧光碎灭现象和Fster非辐射能量转移理论求得了盐酸硫利达嗪小分子与牛血清白蛋白中荧光性氨基酸残基间的空间距离、表观结合常数和结合位点数。并从热力学参数推得药物分子与牛血清白蛋白分子间作用力类型等分子作用信息，进而进一步从药物小分子结构角度讨论了药物与蛋白质的作用规律。
二、流动注射在线氧化荧光法甲氨蝶呤分析体系研究
（一）流动注射在线氧化荧光法测定药物中甲氨蝶呤含量
利用在弱碱性缓冲溶液中二氧化铅可使无天然荧光的甲氨蝶呤氧化生成强荧光的喋啶-6-羧酸，以及丙酮对该荧光体系有增敏作用的现象，建立了流动注射在线氧化荧光法测定甲氨蝶呤的新方法。该方法同样具有线性范围宽、检出限低、精密度好及分析速度快等特点。将其应用于片剂中甲氨蝶呤含量的测定，测定结果与药典法一致。
（二）流动注射氧化荧光法结合透析分离测定人血浆中甲氨蝶呤含量
人血浆中含有的大量蛋白对血浆中甲氨蝶呤的测定会产生干扰。本文在上述实验的基础上利用自制的透析分离器将蛋白以及结合药物的蛋白大分子和游离甲氨蝶呤药物小分子分离，成功的建立了人血浆中甲氨蝶呤含量测定的新方法。对三个不同人血浆中甲氨蝶呤含量进行了测定，同时进行了回收率试验，回收率在95%~106%之间，结果令人满意。
（三）流动注射在线过滤稀释荧光法测定甲氨蝶呤片的溶出度
在上述测定药物中甲氨蝶呤含量新方法的基础上，在药典规定的溶出条件下结合流动注射在线过滤稀释技术建立了流动注射在线氧化荧光法测定甲氨蝶呤片剂溶出度的新方法。在线过滤稀释简化了手工操作，实现了溶液的自动补偿及整个测定过程的自动化。测定结果用Weibull分布函数进行拟合并计算了溶出参数。该法具有采样量小、分析频率高、重现性好等优点。