● 摘要
癌症是导致人类死亡的主要原因之一，中药治疗因其副作用小、安全、有效、药源广等优势引起了国内外广泛关注。木贼作为我国传统的中药，具有降血压、止血、抗炎、抗衰老、抗癌等作用。目前，很少有关于木贼抗癌活性研究的报道。
木贼中含有山柰素、异槲皮素、芹菜素、木犀草素等多种黄酮类化合物。现代研究表明，黄酮类化合物具有抗氧化、抗病毒、抗炎症、护肝、预防心血管疾病、抗肿瘤等多种生物活性及药理作用。目前，关于木贼总黄酮的提取方法的研究相对较少，传统的索氏提取法存在提取率低，耗时长等缺点。微波辅助提取法作为一种先进高效的萃取技术，在植物总黄酮的提取中具有良好的应用前景。
本论文将微波提取技术应用于木贼总黄酮的提取研究，并与温浸法、索氏提取法、超声提取法进行比较，通过正交试验设计研究微波提取木贼总黄酮的最佳条件。同时利用体外培养的肿瘤细胞株（小鼠白血病L1210细胞株）对木贼提取物的抗癌活性及抗癌机理进行研究。结果如下：
（1）采用温浸法、索氏提取法、超声提取法、微波提取法提取木贼总黄酮，结果显示，微波萃取法提取木贼总黄酮的含量最高，为5.407 mg/g；其次是室温提取法，为4.183 mg/g；超声波提取法为4.106 mg/g；索氏法提取率最低，为3.753 mg/g。
（2）通过单因素试验及L9(34)正交实验设计确定了微波辅助提取法的最佳工艺条件：即微波功率为900 W，乙醇浓度为50%，料液比为1:40，温度60 ℃，
提取15 min，提取总黄酮的含量为6.017 mg/g。
（3）MTT法检测了木贼提取物对L1210细胞存活率的影响，结果显示，木贼提取物抑制了L1210细胞的增殖，且抑制作用与细胞初始密度有关，初始细胞密度越小，抑制率越大，当初始细胞密度为2×105 及5×105 cells/ml时，木贼提取物几乎没有起作用。不同浓度的木贼提取物作用1×105 cells/ml 的L1210细胞6，12，24和48 h后，结果发现，木贼提取物以时间和浓度依赖的方式抑制了L1210细胞的增殖，其IC50值分别为772.31 μg/ml，572.73 μg/ml，546.28 μg/ml和 526.55 μg/ml。
（4）流式细胞仪PI单染法检测木贼提取物对L1210细胞周期进程的影响，结果显示，随着药物浓度的增加，G2/M期细胞的百分数从1.98±0.86%逐渐增加到19.94±0.55%，G1/G0期细胞的百分数从33.18±0.13%逐渐降低到16.21±0.18%，而S期细胞的百分数基本保持不变，说明木贼提取物以浓度依赖的方式诱导了L1210细胞G2/M期阻滞。
（5）利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI 双染法检测凋亡率，结果显示，随着木贼提取物浓度的增加，细胞凋亡率也不断增加，说明木贼提取物具有诱导L1210细胞凋亡的作用，应用DAPI荧光染色法观察药物处理后细胞形态学的变化，结果显示，正常对照组细胞核呈圆形，荧光染色均一，而药物组细胞核染色质凝集，细胞核断裂呈现碎片状，进一步证明木贼提取物确实诱导了L1210细胞的凋亡。
（6）利用流式细胞仪Rhodamine 123（Rh 123）染色法检测线粒体膜电位(ΔΨm)水平，结果显示，与对照组相比，药物处理组细胞线粒体膜电位下降，表明线粒体有可能参与了药物诱导的L1210细胞凋亡进程。
（7）流式细胞仪PI染色法检测木贼提取物对L1210细胞DNA损伤的影 响，结果显示木贼提取物以浓度依赖的方式诱导了L1210细胞DNA的损伤，提示DNA损伤有可能是引起L1210细胞凋亡及细胞周期阻滞的原因。
关键词：木贼，黄酮类化合物，微波辅助提取法，细胞凋亡，细胞周期阻滞