● 摘要
缓步动物(Tardigrade)属于微小水生无脊椎动物,以隐生现象著称,在系统分类上为一个独立的门,即缓步动物门(Tardigrada),分成3?纲、5目、13科、100属、近1300?种。大多数生物学家认为缓步动物应该单列为一个独立的门。分子生物学技术对其18SrRNA的研究表明,缓步动物与节肢动物的亲缘关系最近,二者互为姊妹群体,由于蜕皮机制建立,使得它们在系统进化树上组成一类蜕皮动物。缓步动物两侧对称,有4对足,足的末端有爪,体长250-500μm。具备比较完善的神经系统、消化系统以及繁殖系统,其呼吸与循环依靠发达体腔来完成。缓步动物多数是陆生种类,一般生活在潮湿苔藓、地衣、土壤、落叶及垫状的开花植物上。缓步动物能在极端恶劣的环境条件下存活,以其独特的隐生现象著称。高压、失水、低温和缺氧等都能使缓步动物步入隐生状态,包括高压隐生、低湿隐生、低温隐生与低氧隐生等四种形式,以帮助其度过不良环境。缓步动物的形态学分类鉴定的主要依据包括表皮、腿部、爪、口器复合物、吸咽、头部附属物、生殖结构及卵等的特点。
DNA条形码技术是以一段标准DNA片段为工具进行物种鉴定的技术。目前进行的DNA条形码工作中常用基因片段有18S?rRNA和16S?rRNA、12S?rRNA基因及细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(Cytochrome?C?oxidase?subunitⅠ,COⅠ)。和rRNA基因相比,COⅠ基因有以下优点:保守性好且有一定的变异,基因序列长度适于通用引物扩增。综基因序列长度适于通用引物扩增。综合基因序列进化速率与长度方面的考虑,本实验选定COⅠ基因作为条形码标准片段。
本实验对4种缓步动物11个个体的COⅠ基因序列进行提取测定和分析,并与GenBank中下载的6种缓步动物19条COⅠ基因序列进行比对分析,用邻接法(NJ)、最大简约法(MP)、最大似然法(ML)与贝叶斯法(BI)构建系统发育树,研究了共计7种缓步动物30个个体之间的系统发育关系。结果表明,这几种缓步动物在DNA分子水平的分类与形态学分类结果基本一致。
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