● 摘要
从苹果幼果中提取分离苹果多酚，在8种大孔树脂中，X-5树脂具有最高的吸附能力和解吸率。针对X-5树脂，对于溶液的pH值、进样液中多酚的浓度、洗脱剂、吸附曲线分别进行了研究，经过一次解吸和吸附过程后，苹果幼果多酚产品的纯度为由35.17%提高到74.64%，回收率为89.35%，绿原酸和根皮苷分别用X-5树脂和聚酰胺树脂进行分离纯化，最终，绿原酸的纯度为15.20%，回收率为89.16%，而根皮苷的纯度为97.52%，回收率为64.95%。实验结果表明，本文提供的分离纯化方法可以实现大规模工业生产。
经过连续洗脱纯化，共得到4种多酚组分，分别为苹果幼果总多酚、30%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及根皮苷。分别研究这4种组分对人唾液α-淀粉酶的抑制活性，结果显示总酚和30%乙醇洗脱物对α-淀粉酶具有较强的抑制活性，而70%乙醇洗脱物和根皮苷对α-淀粉酶的抑制活性较弱。为了研究总酚和30%乙醇洗脱物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力，分别测定了这两种组分对两种碳水化合物水解酶的半数抑制浓度(IC50)及对酶的最大抑制能力，并与药用阿卡波糖进行了比较。结果显示总酚和30%乙醇洗脱物能较强地抑制唾液α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性，30%乙醇洗脱物对α-淀粉酶的半数抑制浓度为67.0726±4.12μg/mL，比阿卡波糖的半数抑制浓度(12.34±1.57μg/mL)大，而其对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度为42.68±3.47μg/mL，约为阿卡波糖的一半(88.53±4.19μg/mL)。酶促反应的动力学结果显示，30%乙醇洗脱物是α-淀粉酶的竞争型抑制剂，酶促反应的最大反应速率保持在6.17×10-4 M/min左右。在30%乙醇洗脱物中对水解酶有抑制作用的活性物质为绿原酸，低聚原花青素，可溶性单宁等物质。以上结果显示苹果幼果多酚类物质中30%乙醇洗脱物是一种碳水化合物水解酶潜在的抑制剂，可以用于制药工业来治疗或预防糖尿病。