● 摘要
微透析(Microdialysis)技术是一种将灌流取样和透析技术结合起来并逐渐完善的一种从生物活体内进行动态微量生化取样的新技术。其具有活体连续取样、动态观察、定量分析、采样量小、组织损伤轻等特点。微透析技术最大的优点是可在基本上不干扰体内正常生理过程的情况下进行在体、实时和在线取样，透析过程探针周围的组织液成分不会发生改变，所以可以持续收集样品。交换后的透析液被采集，通过高效液相或其它仪器做进一步的分析。随着微透析采样和检测灵敏度的不断提高，微透析技术迅速发展起来，成为生物化学研究中一个引人注目的新领域。从20世纪90年代起这项技术在生命科学研究中进入高潮。在线微透析是一种微量和动态的连续采样方法，它同紫外、荧光、化学发光或电化学方法联合，已被广泛应用于活体分析和过程监测及药物与蛋白相互作用和药代动力学研究等。它不仅可以最大限度的减少样品损失，获得较好的准确性和重复性，而且可有效降低样品收集与分析之间的时间间隔，缩短分析时间。 电化学发光(Electrochemiluminescence or Electrogenerated Chemiluminescence，ECL)是指通过电化学的方法在电极表面产生一些特殊的物质,这些物质之间或与体系中其它组分之间通过电子传递形成激发态，由激发态返回到基态产生发光现象，是电化学与化学发光方法相结合的产物。该方法具有化学发光灵敏度高、线性范围宽和仪器简单等优点。同时由于发光是通过电化学方法激发而产生，该方法又具有易于实现时空上的控制、重现性好和试剂稳定等优点。在众多的电化学发光体系中，联吡啶钌电化学发光由于适用范围广、抗干扰能力强、结果可靠、试剂稳定、线性范围宽、试剂可以再生等优点且已被广泛用于科学研究和实际的临床分析，而受到广泛的关注。而将可电化学再生的ECL试剂固定于电极表面，可获得ECL传感器，从而减少分析过程中试剂的消耗并简化实验装置。 当药物进入血液后，药物分子能不同程度的与血浆蛋白发生可逆结合，其中与血浆蛋白分子结合的药物，由于分子量较大很难跨膜转运到达作用部位。而游离的药物则可自由的通过毛细血管壁进入到靶器官产生药效；一些重要的药代动力学性质如肝脏代谢率、肾清除率、生物膜渗析率以及稳态分布量都取决于药物的游离部分。因此药物与蛋白相互作用的研究及相关参数的确定具有非常重要的理论和现实意义。 本文设计了一种非常简单、稳定和耐用的固定化联吡啶钌电化学发光传感器，与微透析采样结合，实现了灵敏、快速的在线药物与蛋白相互作用的研究。