● 摘要
蚯蚓，又称地龙，属寡毛纲环节动物门。在我国入药已有四千余年的历史，具有解热、镇痉、活络、平喘等功效，是一种常见的动物药材。目前，研究主要集中在蚯蚓纤溶酶、抗肿瘤蛋白、抗菌肽等成分的提取和纯化方面。研究表明，蚯蚓体内还含有酶类，它们具有重要的生理功能，可以清除体内多余的自由基，能够治疗疾病延缓衰老。
蚯蚓体内的酶类包括过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。GOD在有氧条件下能专一性地催化β-D-葡糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，在各行业具有广泛的应用。目前，GOD的提取来源主要有黑曲霉和青霉属菌株，动植物组织中GOD的含量极其低，未见从蚯蚓中提取纯化GOD的相关报道。从蚯蚓中提取并纯化得到GOD，并且实现与CAT、SOD的联合提取，这不仅将拓宽GOD的来源，并且能够扩展蚯蚓的应用范围，对蚯蚓的进一步开发利用具有重要意义。
闪式提取技术与传统提取方法相比，在提取时间，提取效率方面具有明显的优势，因此，从节能高效方面考虑，本研究采取闪式提取这一新型方法对GOD、CAT、SOD进行联合提取。利用正交设计优化实验条件，得到最优条件为：固液比1:4.5(g/mL)，闪提时间45s，超声时间30min。通过酸沉淀，羧甲基纤维素 CM-22 离子交换层析和DEAE离子交换层析实现了GOD的纯化，回收率达到了60.8%，比活达到了2684.2 mU/mg，纯化倍数达到37.2倍。本实验提纯的GOD最适pH为7，酶在pH4~7区间较稳定，酶活保持在80%以上，酶最适温度为37℃，温度升高时，酶迅速失活，此结果表明蚯蚓来源的GOD与真菌来源GOD在稳定性方面具有一定差异性，这对进一步的研究及工业应用具有一定的指导意义。