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一、名词解释

1． Edman 降解法（gdmandegradation ）。

【答案】Edman 降解法，又称苯异硫氰酸酯法，是指从肽链的游离的

的序列的过程。末端测定氨基酸残基末端氨基酸被苯异硫氰酸酯（PITC ）修饰，然后从肽链上分离修饰的氨基酸，再用乙酸乙酯抽提后，可用层析等方法鉴定。余下一条缺少一个氨基酸残基的完整的肽链再进行下一轮降解鉴定循环。

2． 同源重组（homologous recombination）。

【答案】同源重组是指在两个DNA 分子的同源序列之间直接进行交换的一种重组形式。同源重组不依赖于序列 的特异性，只依赖于序列的同源性。

3． 表达载体（expression vector）。

【答案】表达载体是指为使插入的外源DNA 序列可转录，进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体。

4． 退火（annealing ）。

【答案】退火是指DNA 由单链复性变成双链结构的过程。来源相同的DNA 单链经退火后完全恢复双链结构，不同来源DNA 之间或DNA 和RNA 之间，退火后形成杂交分子。

5． 锌指结构（zinc finger）。

【答案】锌指结构是指基因表达调节蛋白的结构“模块”，组成与DNA 的结合区；由30个氨基酸组成，其中 含有2个Cys 和2个His 、或4个Cys ，4个氨基酸残基位置在正四面体四个角，锌离子位置相当在中心，锌离子和氨基酸之间形成配位键，使这段肽链成指状，故称锌指。

6． 丝氨酸蛋白酶。

【答案】丝氨酸蛋白酶是指活性部位含有在催化期间起着亲核体作用的丝氨酸残基的蛋白酶。

7． 协同效应（cooperativity ）。

【答案】协同效应是指一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象。如果是促进作用则称为正协同效应，如：带氧的Hb 皿基协助不带氧亚基结合氧；如果是抑制作用则称为负协同效应。

8． 基本氨基酸。

【答案】组成蛋白质的常见氨基酸有20种，又称组成蛋白质的基本氨基酸，除R 为氢原子（即甘氨酸）外都是L-氨基酸。

二、问答题

9． 为什么tRNA 上会存在大量的修饰型的核苷酸？其生物学意义又是什么？

【答案】tRNA 上存在的大量修饰型核苷酸是

生物学意义是：

（1）不易被降解而增强

（2）是氨酰

（3）促进的稳定性； 的特征结构，即作为“第二密码”的结构基础； 合成酶识别底物转录后加工的产物。这些修饰型核苷酸的三级结构形成，是倒“L ”形精细部位结构差异的重要原因，对于保持

的特异性很必要。

10．氨甲蝶呤和氨基蝶呤可以用于肿瘤治疗，其原理是什么？为什么不能长期使用？

【答案】氨甲蝶呤和氨基蝶呤都是叶酸的结构类似物，可以作为底物类似物抑制二氢叶酸还原酶，从而抑制四氢叶酸的合成，后者是一碳单位载体，参与胸腺嘧啶核苷酸、胸腺嘧啶和多种氨基酸的生物合成，与核酸和蛋白质合成关系密切，因此氨甲蝶呤和氨基蝶呤可以抑制肿瘤细胞的增殖，当然也可以抑制正常细胞的増殖，但是由于肿瘤细胞分裂旺盛，所以受影响更大，可以短时间内用于肿瘤治疗。

11．溶液A 中含有浓度为lmol/L的20个碱基对的DNA 分子，溶液B 中含有0.05mol/L的400个碱基对的DNA 分子，所以每种溶液含有的总的核苷酸残基数相等。假设DNA 分子都有相同的碱基组成。

（1）当两种溶液的温度都缓慢上升时，哪个溶液首先得到完全变性的DNA?

（2）哪个溶液复性的速度更快些？

【答案】（1）溶液A 中的DNA 将首先被完全变性，因为在20个碱基对螺旋中的堆积作用力比在400个碱基对螺旋中的力小很多，在DNA 双链的末端的DNA 的碱基对只是部分堆积。在片段短的分子中这种“末端效应”

更大。

（2）在溶液A 中复性的速率更大。成核作用（第一个碱基对的形成）是一个限速步骤，单链分子的数目越大，重新形成碱基对的概率就越大，因而在溶液A 中的DNA （含有2mol/L单链DNA ）将比溶液B 中的DNA （含有0.1mol/L单链DNA ）更快地复性。

12．茚三酮与氨基酸或氨基化合物作用后可生成一种蓝紫色产物。大鼠肝脏的磷脂用薄层层析等方法分离后，用茚三酮显色，可检测哪些磷脂？

【答案】磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸和乙醇胺缩醛磷脂

13．测定丙氨酸转氨酶活性的反应系统包括过量而纯净的乳酸脱氢酶和NADH 。在该系统中，丙氨酸消失的速度与分光光度法测定的NADH 消失的速度是相等的。该系统是如何运行的? 请予以说明。

【答案】丙氨酸转氨酶活性测定的这个方法是一种偶联反应试验的例子。在偶联反应中，缓

慢的转氨作用的产物丙酮酸很快地被后续反应消耗掉。因此，乳酸脱氢酶催化一种可指示的反应。

由于每使1分子的丙氨酸转氨就要使1分子的NADH 消失，因此，丙氨酸消失的速度与NADH 消失的速度相等。NADH 的消失可通过用分光光度法于340nm 观察NADH 的消失来监测。两个反应过程如图所示。

图 丙氨酸代谢途径

14．胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶以及弹性蛋白酶是来自同一组织的内肽酶。在它们的三维构象中都含有相同的、恒定的组合：

（1）①有人说，这三种酶虽说是由三个不同的基因编码，但它们却是由一个共同的祖先基因（ancestralgene ）通过同源趋异进化（diveagentevolution ）的进化方式产生的。你认为有道理吗？说说你的理由；

（2）如果当胰蛋白酶活性部位的Asp 定点突变成Asn ，它的催化反应速度降低10000倍。为什么？

【答案】（1）是有道理的。这是因为：①这三种酶的活性中心都含有可与DIFP 起反应的Ser 残基；②在活性部位的Ser 附近都含有相同的氨基酸顺序：

级结构中都含有相同的、恒定的

（2）当胰蛋白酶进行催化反应时

，

与④它们氨基酸的顺序大约有40%相同；⑤它们有很相似的空间结构。 的咪唑基之间形成低能障的氢键，并与Ser195共同组成“电荷转接系统”。这是酶催化反应所必需的。由于Asn 缺少与His 的咪唑基形成氢键的羧基，因此，当Asp 定点突变成Asn 后，上述功能消失，酶的活性会显著降低或丧失。

③在它们的三的组合顺序（相同的电荷转换系统）；