● 摘要
非脂肪组织中脂质储存过剩则被称为异位脂质储存，可能诱发胰岛素抵抗（Insulin Resistance, IR）。骨骼肌异位脂质储存与胰岛素抵抗有着密切的关系。甚至导致二型糖尿病（Type II Diabetes, T2D）。二酰甘油和三酰甘油之间的相互转化是脂质动态平衡重要的一部分。二酰基甘油酰基转移酶（Diacylglycerol O-acyltrasnferase 1, DGAT1）在脂质平衡与代谢中扮演着重要的角色。目前，该蛋白已经成为治疗脂质代谢异常引起的一系列疾病的药物新靶点。但是该蛋白的功能和调控机制尚不清楚。深入的探究此蛋白的调控机制，可以帮助我们更深入的理解脂质代谢，为新药研发提供新思路。
本研究中，我们首先尝试通过多种方法寻找具有活性调控功能的DGAT1磷酸化位点。包括通过氨基酸序列保守性比对，生物信息学网站预测，文献查阅以及磷酸化质谱检测。随后针对这些位点通过单点突变的方式在体外模拟磷酸化和非磷酸化，运用放射性示踪、薄层层析等方法，检测蛋白活性，探究这些位点的磷酸化是否起蛋白活性的改变。最后，又用DGAT1截断体过表达的方式探究其N端对蛋白活性的影响。
本研究首先筛选出15个潜在磷酸化位点。随后，发现了3个具有活性调控功能的丝氨酸残基，分别是S83、S86、S89。最后，通过过表达截断体的方式发现1-95位氨基酸缺失蛋白功能提高；1-118位氨基酸缺失则导致蛋白功能丧失。
这些结果告诉我们，体外实验中，DGAT1 S83、S86、S89模拟磷酸化突变对蛋白活性具有调控功能，提示我们。此外，截断体实验提示我们95-118位氨基酸对DGAT1的功能或保持蛋白空间构象非常重要。