● 摘要
柿子(Diospyros Kaki L.f)属柿树科,为药食同源植物。柿子含有多种生物活性成分,有助于降低血压,软化血管,增加冠状动脉流量,并且能活血消炎,改善心血管功能,还可以促进血液中乙醇的氧化,帮助机体对酒精的排泄,减少酒精对机体的伤害,柿子中的有机酸等有助于胃肠消化,增进食欲,同时有涩肠止血的功效,因此具有重要的研究与开发价值。本文对柿子多糖的提取、分离纯化、结构分析、体外抗氧化活性等进行了系统研究,获得如下结论:
(1)采用单因素试验和正交实验对柿子多糖的热水浸提工艺和超声波辅助提取工艺进行了研究,得出了柿子多糖热水浸提的最佳提取工艺条件为:料液比1:10,浸提温度90℃,浸提时间4h,柿子多糖的得率为7.62%。柿子多糖超声波辅助提取的最佳提取工艺条件为:料液比1:25,超声处理35min后,在80℃下浸提4h,柿子多糖的得率为14.17%。
(2)柿子多糖乙醇沉淀的最佳工艺条件为:柿子多糖提取液:95%乙醇(v/v)为1:4,沉淀时间12h。
(3)以多糖保留率和蛋白质脱除率为考察指标,比较了Sevag法、TCA- Sevag结合法和酶- Sevag结合法对柿子多糖蛋白的脱除效果,确定了柿子多糖蛋白的最好脱除方法是酶- Sevag结合法。其蛋白质的脱除工艺条件为:木瓜蛋白酶(500u/mL)在60℃下酶解3h后,采用Sevag法脱除蛋白质,蛋白质的脱除率为61.2%,多糖的保留率为76.2%。
(4)比较了活性炭和过氧化氢对柿子多糖色素的脱除效果,确定了柿子多糖色素脱除的最佳方法及其工艺条件为:30%双氧水:柿子多糖水溶液(v/v)=1:1,脱色pH=10.0,脱色温度60℃,脱色时间1h,柿子多糖的保留率为94%。
(5)采用季铵盐沉淀法对柿子粗多糖进行分离,得到了水溶性的WPP1和10%氯化钠盐溶性的WPP2两个柿子多糖组分。WPP1和WPP2经Sephadex G-100柱层析、比旋光度法、紫外光谱扫描及高效液相色谱法鉴定均为均一多糖,不含蛋白质、核酸和色素。WPP1是含有a糖苷键的化合物,由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和D-半乳糖四种单糖组成,四种单糖的摩尔比为0.8831:0.6862:0.7022:1,分子量为2.05×105Da。WPP2由阿拉伯糖和D-半乳糖两种单糖组成,其摩尔比为0.8466:1,分子量为2.63×105Da。
(6)研究了柿子多糖的体外抗氧化活性。研究结果表明,柿子粗多糖WPP及其分离组分WPP1和WPP2对羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子具有很好的清除效果,且清除效果与多糖的浓度成正比,在同浓度下,WPP的清除能力要显著高于WPP1和WPP2。